Synthétiseur de PolypeptidesL'étalonnage est le lien central pour garantir la pureté, le rendement et la répétabilité des produits de synthèse. Il est nécessaire d'effectuer un étalonnage systématique pour les modules clés tels que la précision d'alimentation, le contrôle de la température, la stabilité de la pression et le système de détection. Ce qui suit est un processus d'étalonnage étape par étape conforme aux spécifications de l'industrie, applicable aux synthétiseurs de Polypeptides en phase solide courants.
Préparation avant étalonnage: environnement et pré - traitement de l'équipement
Confirmation des conditions environnementales: Stabilisez la température du laboratoire à 20 - 25 ℃ (fluctuation ≤ ± 1 ℃), le contrôle de l'humidité relative à 40% - 60%, évitez l'équipement de soufflage direct à flux d'air. Démarrez le préchauffage de l'appareil 1 heure avant l'étalonnage pour vous assurer que chaque module est en état de fonctionnement stable.
Préparation d'outils et de substances étalons: préparation d'équipements étalons métrologiquement certifiés (p. ex. balances électroniques de classe 0,01 mg, thermomètres étalons, manomètres de précision, pipettes étalons de 100 μl), ainsi que de réactifs pour l'étalonnage tels que le méthanol anhydre (chromatographiquement pur), la solution étalon d'indanetrione (0,1 mol / l), etc.
Nettoyage et inspection de l'équipement: démonter la ligne d'alimentation, la colonne de réaction, laisser sécher après 3 rinçages au méthanol anhydre; Vérifiez la pression du cylindre d'azote (≥ 0,5 MPa), Remplacez les joints d'étanchéité vieillissants et assurez - vous qu'il n'y a pas de fuite dans la ligne.
II. Calibration du module de base: contrôle précis des paramètres clés
(i) Étalonnage du système d'alimentation en liquide: garantir la précision du dosage des réactifs
Étalonnage du débit de la pompe d'alimentation: Choisissez le volume d'alimentation habituel (10 μl, 50 μl, 100 μl), réglez le débit d'alimentation de 10 μl / s, insérez l'extrémité de la ligne d'alimentation dans le tube de centrifugation propre pré - pesé, lancez le Programme d'alimentation. Chaque gradient de volume est répété 3 fois, la masse de méthanol anhydre collectée est pesée avec une balance électronique, le volume d'alimentation réel est calculé en fonction de la densité de méthanol (07918 G / ML à 20 ℃), l'erreur doit être ≤ ± 2%, sinon ajustez la pression du corps de pompe ou Remplacez la bague d'étanchéité.
Calibrage de précision de distribution de réactif: connecter les différentes lignes de réactif séparément à l'interface de pipetage standard, définir une quantité de distribution unique de 50 μl, répéter la distribution 10 fois dans la bouteille jaugée, vérifier l'erreur de volume totale avec la méthode volumétrique, assurer ≤ ± 1%; Vérifiez également la différence de temps lors de l'allocation de synchronisation multi - voies, il faut ≤ 0,5 secondes.
Ii) Étalonnage du système de température et de pression: stabilisation de l'environnement réactionnel
Étalonnage de la température de réaction: insérez le thermomètre standard à l'intérieur de la colonne de réaction (près de la zone de résine), réglez respectivement 25 ℃, 30 ℃, 40 ℃ trois points de température communs, après 30 minutes d'isolation, lisez la valeur de la température, chaque point est répété 3 fois, L'erreur doit être ≤ ± 0,5 ℃. En cas de dépassement, corrigez ou remplacez l'élément chauffant par les paramètres du module de contrôle de la température de l'appareil.
Étalonnage de la pression d'azote: Fermez la sortie de la colonne de réaction, entrez le manomètre de précision dans l'entrée d'azote, réglez la pression 0,1 MPa, 0,2 MPa, 0,3 MPa, lisez après 5 minutes de stabilisation, l'erreur nécessite ≤ ± 0,01 MPa. Testez le taux de purge d'azote après l'étalonnage pour vous assurer que la résine tourne uniformément et sans éclaboussures.
(III) Calibration du module de détection et de contrôle: contrôle précis du processus garanti
Étalonnage du système de détection de l'indanetrione: formuler une solution standard d'indanetrione à une concentration de 0,01 mmol / L, 0,05 mmol / L, 0,1 mmol / L, détection automatique de l'échantillon par l'équipement, enregistrer les valeurs d'Absorbance et tracer la courbe standard, le facteur de corrélation doit être ≥ 0995. Si la linéarité est mauvaise, nettoyez le chemin optique de détection ou remplacez la source lumineuse.
Calibration de contrôle de programme: Écrire un programme de synthèse standard (avec déprotection, lavage, couplage en 3 étapes), enregistrer l'écart du temps d'exécution réel de chaque étape par rapport au temps de consigne, chaque étape est répétée 5 fois, l'écart prend ≤ ± 1 seconde. Vérifiez la réponse de commutation de la ligne lors de la commutation des étapes pour vous assurer qu'il n'y a pas de contamination croisée résiduelle par des réactifs.
Iii. Vérification et enregistrement après étalonnage: assurer la validité de l'étalonnage
Vérification du fonctionnement à vide: effectuez la procédure de synthèse à vide après l'étalonnage, exécutez 3 cycles consécutifs, vérifiez l'état de fonctionnement de chaque module, assurez - vous qu'il n'y a pas de problèmes tels que le liquide de fuite, l'hétérostonie, la dérive des paramètres, etc.
Validation de la synthèse peptidique Standard: le Pentapeptide standard (par exemple Leu - enkephalin) a été sélectionné pour la synthèse, la pureté du produit a été détectée par HPLC, nécessitant ≥ 95% et un écart ≤ ± 2% par rapport aux données post - étalonnage historiques, confirmant l'effet de l'étalonnage.
Archivage des enregistrements d'étalonnage: enregistrez en détail la date d'étalonnage, les conditions environnementales, le personnel d'étalonnage, le numéro d'équipement standard, les données d'étalonnage de chaque module et les valeurs d'écart, collez l'identification de la conformité d'étalonnage et définissez le prochain cycle d'étalonnage (recommandé tous les 6 mois ou étalonnage anticipé après 500 synthèses).