En suivant strictement les spécifications ci - dessus, la densité bactérienne (jusqu'à od600 = 8 - 12), le rendement des produits et la durée de vie de l'équipement peuvent être considérablement améliorés. Dans la pratique, il est nécessaire d'établir un processus standardisé intégrant les caractéristiques physiologiques spécifiques de la souche et de tenir un journal des opérations pour une optimisation rétroactive.

Voici les détails d'utilisation du Shaker liquide et la description des points clés:

I. préparation préalable et manipulation des conteneurs

1. Sélection et stérilisation des conteneurs

La préférence est donnée aux flacons triangulaires (généralement 250 - 500 ml) ou aux fermenteurs à clapet, en fonction du volume de culture, dans des proportions ne dépassant pas 70% du volume du récipient. La verrerie doit être stérilisée à la vapeur à haute pression à 121 ℃ pendant 30 minutes, les bouteilles en plastique peuvent être stérilisées par fumigation à l'oxyde d'éthylène pour éviter que les inhibiteurs résiduels affectent la croissance du germe.

2. Formulation du milieu de culture

Configurer un milieu approprié selon les caractéristiques de la souche (p. ex., milieu LB pour E. coli), ajuster le pH initial (pH bactérien général de 6,8 à 7,2, acidité fongique partielle). Pour enrichir un métabolite spécifique, des inducteurs ou des substances précurseurs peuvent être ajoutés.

II. Spécifications d'inoculation et de chargement

1. Opération stérile

Terminer l'inoculation à l'intérieur de l'armoire de biosécurité, retirer le tampon après que la flamme brûle l'embouchure de la bouteille, accéder à la quantité appropriée de la souche (environ 5% - 10% de la quantité inoculée), rapidement fermer et passer à travers la fenêtre de transfert dans le shaker. Notez que la durée de fonctionnement est contrôlée dans la plage effective de la flamme de la lampe à alcool.

2. Chargement symétrique équilibré

Placez le récipient contenant le liquide bactérien symétriquement sur le shaker, en veillant à ce que la charge soit équilibrée. Le chargement excentrique provoque des vibrations anormales du moteur et réduit la durée de vie de la machine. L'utilisation de blocs de contrepoids pour combler les espaces vides est recommandée lors de la culture de gros volumes.

Iii. Paramètres et surveillance

1. Contrôle de la température

Selon le réglage de la température de croissance optimale de la souche (par exemple, moisissure 30 ℃, thermophile 55 ℃), l'activation de la fonction de préchauffage rend la différence de température dans la cavité ≤ ± 0,5 ℃. Vérifiez la température réelle toutes les 4 heures lors d'un fonctionnement prolongé et évitez la mort bactérienne due à une défaillance du contrôle de la température.

2. Régulation de la vitesse de rotation

Combiner l'efficacité de l'oxygène soluble avec les dommages de cisaillement: les bactéries aérobies communes 200 - 300 RPM, les champignons filamenteux peuvent être ajustés en dessous de 150 RPM; La culture anaérobie doit être réduite à 80 - 120 RPM et azotée pour remplacer le gaz. Observez la production de mousse et ajoutez un antimousse si nécessaire.

3. Gestion des programmes de temps

La stratégie de contrôle du temps segmenté est utilisée: adaptation à faible vitesse pendant la période de retard (0 - 6H), élévation de la phase logarithmique à la vitesse de rotation cible, ralentissement de la phase de stabilisation pour prolonger la phase de production d'enzymes / sporulation. Réglez la procédure de décélération 15 minutes à l'avance pour éviter que l'arrêt ne déclenche un choc de vortex.

Iv. Gestion des processus opérationnels

1. Tournée de statut

Vérifiez les éléments suivants toutes les heures: ① si les fixations sont desserrées; ② ouverture de l'orifice d'évacuation de l'eau de condensation; ③ variation de la hauteur du niveau du liquide à l'intérieur de la bouteille (juger du taux d'évaporation); ④ un bruit anormal ou une mauvaise odeur apparaît.

2. Temps de réapprovisionnement contrôlé

En utilisant une stratégie de flux intermittent plus, la source de carbone / azote est complétée par un tube de silicone stérile lorsque l'électrode do montre une chute d'oxygène dissous. Le volume de supplément ne dépasse pas 10% du volume de travail à la fois, évitant les mutations osmolaires.

3. Prévention et contrôle de la pollution

Une augmentation anormale de la turbidité a été trouvée pour mettre fin immédiatement à la culture et la microscopie des échantillons a confirmé la contamination. En cas de contamination grave, la paroi interne du Shaker doit être essuyée avec un liquide désinfectant, puis l'irradiation UV peut être poursuivie après 30 minutes.

V. récolte et traitement ultérieur

1. Techniques d'échantillonnage

Échantillonnage latéral par siphon ou par seringue pour éviter de perturber le précipité du fond. La pesée avant et après l'échantillonnage enregistre les variations de poids humide, en convertissant les courbes d'accumulation de biomasse.

2. Élimination des déchets

Les récipients pressurisés doivent être abaissés avant d'être ouverts et les cultures contenant des agents pathogènes doivent être évacuées après inactivation à 121 ° C pendant 30 minutes. Les pinces métalliques sont stérilisées par immersion dans de l'éthanol à 75% et les pièces en plastique sont remplacées par des sacs à ordures spéciaux qui sont jetés hermétiquement.

3. Entretien du matériel

Nettoyage mensuel de la poussière accumulée par le filtre du ventilateur, révision trimestrielle de l'étanchéité de la courroie de transmission. Videz le réservoir d'eau et appliquez de la graisse de silicone antirouille lorsque vous ne l'utilisez pas pendant une longue période, l'écran numérique est recouvert d'un bouclier de protection contre la poussière.