I. Introduction

• SF9La Cellule d'insecte est une lignée cellulaire eucaryote importante dérivée du tissu ovarien de la chrysalide de la noctuelle des prés, cultivée sur le principe d'un haut niveau d'expression de protéines recombinantes en imitant l'environnement physiologique de l'insecte (température appropriée, nutriments et échange de gaz) pour soutenir la prolifération cellulaire et servir d'hôte aux Baculovirus.

Configuration habituelle:

• Température:27℃

• Vitesse de rotation:120-140 tr/min(culture en suspension)

II. Détails du programme

• Scène typique:

SF9L'application la plus importante des cellules est avec les systèmes d'expression Baculovirus (tels queBac-à-BacSystèmes) combinés pour l'expression à haut niveau de protéines recombinantes complexes, de particules virales et d'antigènes vaccinaux, sont des outils importants en biopharmaceutique et en recherche fondamentale.

• Paramètres et principes de configuration:

Température:SF9La température de culture des cellules doit être strictement contrôlée à26 à 28Entre ℃, généralement fixé à27℃. C'est parce que les cellules, qui sont des sources d'insectes, ont une température de croissance optimale bien inférieure à celle des cellules de mammifères. La température est un facteur clé qui affecte la croissance cellulaire et l'expression des protéines une fois que la température de culture dépasse30℃, entraînera un stress thermique cellulaire, une stagnation de la croissance et même une mort massive, causant des dommages irréversibles. Par conséquent, l'étalonnage de la température de l'incubateur avec une surveillance continue est essentiel

Vitesse de rotation:Lors de la mise en culture en suspension, la vitesse de rotation est généralement réglée à120à140 tr/minDans les limites de. Cette vitesse de rotation permet d'assurer une suspension uniforme des cellules dans le milieu de culture, en évitant la sédimentation, tout en assurant un échange de gaz suffisant (transfert d'oxygène) pour la croissance cellulaire. Une vitesse de rotation trop basse provoque une agrégation cellulaire et un manque d'oxygène; Trop élevé crée alors une force de cisaillement excessive, causant des dommages mécaniques aux cellules. En outre, afin de garantir l'efficacité de l'échange de gaz, le volume de culture ne dépasse généralement pas la capacité totale du shaker.2 / 5- Oui.

• Précautions et points de fonctionnement:

effectuerSF9Lors de la culture cellulaire, les liens suivants nécessitent une attention particulière:

1. Sensibilité à la température:SF9Les cellules sont extrêmement sensibles à la température. La température de culture ne doit jamais être supérieure à30℃, sinon il causera des dommages irréversibles aux cellules. Même dans les opérations telles que la réanimation qui sont brièvement hors de l'environnement de culture, cela doit être fait le plus rapidement possible, en évitant de les placer à température ambiante ou à des températures plus élevées pendant de longues périodes.

2. Évitez les dommages mécaniques:SF9Les cellules sont très sensibles aux forces mécaniques telles que le soufflage, les bulles, etc. Toutes les opérations, telles que le resurfaçage, le soufflage de passage, doivent être effectuées en douceur, en essayant d'éviter de créer trop de bulles d'air pour maintenir la haute vitalité cellulaire.

3. Observation de la morphologie cellulaire:Au cours de la culture, il a été observé qu'il y avait des particules noires à l'intérieur de la cellule appartenant à un phénomène normal, qui sont des vésicules sécrétrices de la cellule elle - même et la réfraction des organites. Après une période de culture murale, certaines cellules peuvent dépasser des tentacules plus longs, ce qui n'est pas non plus une manifestation de contamination ou de mauvais état. Si les débris extracellulaires augmentent, ils peuvent être éliminés par échange de liquide par centrifugation à basse vitesse.

4. Récupération et congélation:Recommandé après récupération dans24Changez le milieu frais une fois dans l'heure pour éliminer les substances nocives libérées par les cellules mortes. L'utilisation d'une cassette de refroidissement programmée est recommandée lors de la congélation et la réanimation régulière vérifie l'activité des cellules stockées pour assurer la qualité de la Banque de cellules de semences.

Iii. Provenance de la littérature

1. O'Reilly, D. R., Miller, L. K., et Luckow, V. A. (1992). Vecteurs d'expression de baculovirus : un manuel de laboratoire. W.H. Freeman et Compagnie

   Description: ce livre est un manuel classique dans le domaine des systèmes d'expression Baculovirus, qui détailleSF9Biologie fondamentale des lignées cellulaires d'insectes, méthodes de culture et processus expérimentaux de transfection, infection.

2. Luckow, V. A. & Summers, M. D. (1988). Tendances dans le développement des vecteurs d'expression du baculovirus. *Bio/Technologie, 6*(1), 47 à 55.

   Explication: cet article de synthèse à fort impact examine systématiquement le parcours de développement des vecteurs Baculovirus et clarifieSF9Rôle clé des lignées isocellulaires dans l'optimisation du système.