Le principe technique et le processus de fonctionnement du multi - channel Domestic Protein Blotting instrument (westernblotting instrument) reposent principalement sur ses capacités de détection des protéines efficaces et précises. Le Western blot (Western Blot) est une technique expérimentale utilisée pour détecter et analyser l'expression de protéines spécifiques et est largement utilisée dans les domaines de la biologie moléculaire, de la recherche médicale, etc.
Voici le principe technique et le processus de fonctionnement de l'imprimante de protéine domestique multicanaux:
Principes techniques
Le principe de base de l'empreinte protéique est la séparation des protéines d'un échantillon par la taille de leur poids moléculaire par électrophorèse sur gel et le transfert des protéines isolées sur la membrane par transmembranage. La présence de la protéine par rapport à la quantité exprimée est ensuite détectée par liaison à un anticorps spécifique sur la membrane.
Le multi - channel protein blotter est principalement conçu pour améliorer l'efficacité expérimentale en mettant en œuvre le traitement parallèle de plusieurs canaux d'échantillon dans un seul instrument. Ses principes techniques de base comprennent:
Séparation des protéines:
électrophorèse sur gel (SDS - page): les protéines de l'échantillon sont séparées par électrophorèse sur gel de polyacrylamide, les protéines de plus petit poids moléculaire migrent plus rapidement dans le champ électrique et les protéines plus grandes migrent plus lentement, permettant ainsi une séparation par taille.
Transfert de protéines:
Transmembranage: la protéine isolée est transférée du gel sur une membrane (généralement une membrane de PVDF de polyfluorure de vinylidène ou une membrane de nitrocellulose) par électrotransfert (voie électrophorétique). Les protéines sur la membrane sont fixées à des endroits spécifiques.
Détection des protéines:
Incubation d'anticorps: en utilisant un anticorps spécifique (généralement un anticorps dirigé contre la protéine cible), l'anticorps se lie à la protéine cible sur la membrane.
Réaction de chimiluminescence ou de rendu des couleurs: un anticorps secondaire marqué par une enzyme se lie à une protéine cible et produit un signal par réaction de chimiluminescence ou de rendu des couleurs qui détecte la présence et la quantité de protéine exprimée par un système d'imagerie.
Technologie multicanal:
Le multi - channel protein blotter est basé sur le traditionnel Single Channel Protein Blot et est capable de traiter simultanément plusieurs canaux d'échantillon au cours d'une même expérience. Ceci est réalisé grâce à plusieurs trous d'échantillon et à des opérations parallèles, ce qui améliore l'efficacité de l'expérience et la comparabilité des données.
Processus opérationnels
Le processus opérationnel d'un imprimeur de protéines domestique multicanaux comprend généralement plusieurs étapes principales comme suit:
1. Préparation des échantillons
Prélever un échantillon de cellules ou de tissus à détecter.
Utilisez un tampon de lyse pour briser les cellules et extraire les protéines.
Les protéines extraites sont quantifiées en veillant à ce qu'une quantité égale de protéines soit ajoutée à chaque échantillon.
2.sds-page électrophorèse
On prépare des gels de polyacrylamide, généralement à l'aide de gels SDS - page, le SDS (Laurylsulfate de sodium) servant à détruire la structure des protéines, à les charger négativement et à les séparer par taille de poids moléculaire.
Les échantillons sont chargés dans un gel et soumis à une électrophorèse dans un champ électrique qui sépare les protéines de différents poids moléculaires.
3. Tourner la membrane
Les protéines du gel sont transférées sur une membrane de PVDF ou une membrane de nitrocellulose. Le processus de transmembranage est généralement réalisé par transfert électrique.
À l'aide d'un instrument de transmembranage (tel qu'une unité de transmembranage dans un appareil de transfert de protéines multicanaux), Ajustez les paramètres tels que le courant, la tension, le temps de transfert et assurez - vous que les protéines sont transférées efficacement et uniformément sur la membrane.
4. Blocage
Les membranes sont traitées à l'aide d'un liquide de blocage, tel qu'une poudre de lait écrémé à 5% ou une solution de BSA, qui ferme les sites de liaison non spécifiques et empêche les anticorps de se lier au reste de la membrane.
5. Incubation des anticorps
Un anti - incubation: la membrane est placée dans une solution d'un anti, généralement un anticorps primaire spécifique dirigé contre la protéine cible. Le temps d'incubation peut varier de 1 heure à une nuit selon les caractéristiques de l'anticorps.
Incubation anti - secondaire: incubation avec des anticorps secondaires marqués avec des enzymes telles que la peroxydase de raifort HRP ou d'autres molécules détectables pour améliorer le signal.
6. Détection de chimiluminescence
La réaction est effectuée à l'aide d'un substrat chimiluminescent, tel qu'un réactif ECL, et l'enzyme HRP catalyse la luminescence du substrat.
Les signaux lumineux sont capturés à l'aide d'un système d'imagerie, tel qu'un système d'imagerie par chimiluminescence, qui génère des images de détection de protéines.
La conception multicanaux de l'imprimante de protéine multicanaux permet la capture de signal de plusieurs échantillons simultanément, améliorant l'efficacité.
7. Analyse des données
Le niveau d'expression des protéines est analysé en fonction de la luminosité et de la taille des bandes détectées. La force de la bande est proportionnelle à la quantité de protéine cible exprimée.
L'analyse quantitative des bandes a été effectuée à l'aide d'un logiciel et la quantité relative d'expression de la protéine a été extrapolée par rapport à une échelle protéique standard.
Avantages et caractéristiques
Fonctionnement parallèle multicanal: plusieurs échantillons peuvent être traités simultanément, améliorant ainsi la productivité et la comparabilité des données.
Degré élevé d'automatisation: réduire l'erreur humaine en contrôlant automatiquement les étapes de transmembranage, d'incubation d'anticorps, de lavage, etc. avec l'instrument.
Haute sensibilité et haut débit: convient à la détection de protéines de faible abondance et est capable de traiter un grand nombre d'échantillons.
Large champ d'application: peut être appliqué à de nombreuses expériences telles que l'analyse du volume d'expression des protéines, la vérification de la spécificité des anticorps, l'étude des interactions protéine - protéine, etc.
conclusion
L'imprimante de protéine domestique multicanal améliore considérablement l'efficacité et la précision des expériences de protéine - blot grâce à un processus opérationnel automatisé et efficace. Il offre aux chercheurs des outils de détection de protéines plus rapides et à débit plus élevé, en particulier lorsqu'il est nécessaire de traiter plusieurs échantillons simultanément.