Lyseur de PolypeptidesLes protéines complexes sont transformées en segments peptidiques analysables en interrompant les liaisons peptidiques dans les chaînes polypeptidiques par des méthodes physiques, chimiques ou biologiques.Lyseur de PolypeptidesSon cheminement technologique se divise principalement en trois grands systèmes:

Méthode enzymatique

Principe: les liaisons peptidiques à l'extrémité carboxylique de résidus d'acides aminés spécifiques (par exemple, lysine, Arginine) sont identifiées avec précision et cassées dans des conditions douces (par exemple, température constante de 37 ° c) en utilisant le pouvoir de clivage spécifique des enzymes biologiques (par exemple, trypsine, pepsine).

Avantages: les fragments de produits de lyse ont une longueur uniforme et conviennent à des scénarios tels que l'analyse de séquences polypeptidiques, l'identification par spectrométrie de masse, etc. Par exemple, la trypsine peut cliver la sérum albumine bovine en un mélange de segments peptidiques avec une couverture théorique supérieure à 80% en 16 heures.

Limitations: sensibilité aux conditions enzymolytiques (p. ex., pH, température) et difficulté à traiter les Polypeptides contenant de grandes quantités de Proline ou d'acides aminés modifiés.

Méthode de craquage chimique

Principe: fracture au niveau moléculaire par un acide fort tel que l'acide chlorhydrique 6m ou une base forte telle qu'une solution d'hydroxyde de sodium à haute température (100°C), adaptée aux collagènes difficiles à dégrader, kératines, etc.

Avantage: haute efficacité de craquage, peut traiter des échantillons complexes.

Limitations: les conditions réactionnelles sont sévères et peuvent conduire à des ruptures non spécifiques ou à des modifications de la chaîne latérale des acides aminés nécessitant des étapes de purification ultérieures.

Méthode de craquage physique

Principe: l'utilisation d'un laser, tel qu'une impulsion laser excimère de 193 nm, pour générer une hypertempérature locale pendant un temps de l'ordre de la nanoseconde, provoque une rupture non thermodynamique de la liaison peptidique.

Avantages: aucun résidu de réactif chimique, idéal pour les échantillons sensibles à la contamination chimique (par exemple, les échantillons de diagnostic clinique).

Limites: coût élevé de l'équipement et exigences techniques strictes en matière d'exploitation.