La méthode d'analyse du spectromètre de masse haute résolution d'occasion est principalement développée autour de ses fonctions de base, y compris la préparation des échantillons, le fonctionnement de l'instrument, la collecte et le traitement des données, tout en intégrant ses caractéristiques haute résolution pour l'optimisation, les méthodes d'analyse spécifiques suivantes:
I. préparation des échantillons
Adaptation de l'état de l'échantillon: Choisissez le traitement approprié selon que l'échantillon est solide, liquide ou gazeux. Par exemple, si l'échantillon liquide est de faible pureté, les impuretés doivent être éliminées par filtration, extraction, concentration, etc.; Si l'échantillon solide est thermiquement stable, il peut être broyé en poudre après dissolution, le solide insoluble peut nécessiter une diffraction biochimique ou utiliser la technologie d'échantillonnage direct du solide; L'échantillon de gaz est généralement prélevé directement par une vanne de prélèvement de gaz ou enrichi par un dispositif d'adsorption - désorption.
Sélection du solvant: Choisissez un solvant compatible avec la source d'ionisation, comme les solvants polaires couramment utilisés pour les sources ESI et les solvants apolaires couramment utilisés pour les sources ei, en évitant la réaction du solvant avec l'échantillon ou la production d'ions perturbateurs.
Traitement des échantillons biologiques: pour les échantillons biologiques (par exemple, sang, urine), il est nécessaire d'éliminer les interférences macromoléculaires telles que les protéines, telles que la méthode de précipitation, la filtration centrifuge.
II. Fonctionnement des instruments
Préchauffage de l'appareil: démarrez l'appareil dans l'ordre des instructions de l'instrument, allumez généralement la pompe à vide, l'alimentation électrique d'abord, puis l'hôte et le logiciel de station de travail, assurez - vous que le système de vide atteint le degré de vide de travail, la source d'ions, l'analyseur de qualité et d'autres composants sont stables, le temps de préchauffage est généralement de 30 minutes à 2 heures.
Paramètres de la source d'ionisation:
Sélection de la méthode d'ionisation: Sélectionnez la méthode d'ionisation en fonction du type d'échantillon, par exemple ei, esi, MALDI, etc.
Réglage des paramètres: réglage de la température de la source d'ions, de la tension d'ionisation, de la vitesse du flux d'air (par exemple, gaine de gaz pour esi, gaz auxiliaire), etc. Par exemple, la source d'ei définit l'énergie des électrons (typiquement 70 EV), la température de la source d'ions (150 - 300 ° c); La source ESI définit la tension de pulvérisation (3 - 5 kV), la température du capillaire (200 - 350 ° c), la pression du gaz de pulvérisation.
Paramètres de l'analyseur de qualité:
Plage de balayage: définit la plage de balayage (plage M / Z, par exemple 50 - 1000).
Vitesse de numérisation et résolution: sélectionnée en fonction de la demande, qualitative nécessite une haute résolution et quantitative nécessite une numérisation rapide. Les Spectromètres de masse haute résolution peuvent fournir des pics M / z jusqu'à 4 - 5 décimales, ce qui aide à identifier les composés avec plus de certitude et de confiance.
Paramètres de l'équipement de couplage: Si vous utilisez en association avec la chromatographie (par exemple, GC - MS / LC - MS), vous devez régler les conditions chromatographiques de manière synchrone (par exemple, la température de la colonne, le débit, la proportion de phase mobile) pour vous assurer que la séparation chromatographique correspond à la détection par spectrométrie de masse.
Iii. Acquisition et traitement des données
Méthode d'approche:
Échantillons chromatographiques: les échantillons sont séparés par chromatographie en phase gazeuse (GC) ou en phase liquide (LC) avant d'entrer dans la spectrométrie de masse via une interface, adaptée aux mélanges complexes (par exemple, aliments, échantillons environnementaux).
Échantillonnage automatique: l'échantillon de masse peut être échantillonné séquentiellement par un échantillonneur automatique, améliorant l'efficacité et réduisant l'erreur humaine.
Acquisition de données: la fonction "acquisition" du logiciel de la station de travail est activée et l'instrument effectue automatiquement un balayage du rapport masse / charge des ions de l'échantillon, générant un spectrogramme de masse en temps réel (M / z pour l'axe horizontal et Force ionique pour l'axe longitudinal). Pour l'analyse quantitative, le signal de spectrométrie de masse de l'étalon doit être recueilli, la courbe standard (Force ionique par rapport à la concentration) doit être établie avant l'analyse de l'échantillon inconnu.
Traitement des données:
Analyse qualitative: détermination de l'espèce du composé par alignement des pics ioniques caractéristiques (p. ex., pics d'ions moléculaires, pics d'ions fragmentés) avec des banques spectrales standard (p. ex., bibliothèque NIST); La spectrométrie de masse à haute résolution peut donner directement un poids moléculaire précis, aidant à l'identification de la structure.
Analyse quantitative: les ions caractéristiques du composé cible sont choisis (tels que les paires d'ions mère - fils, applicables à la spectrométrie de masse triple quadrupôle), la concentration de l'échantillon est calculée à partir d'une courbe standard.
Vérification des résultats: les résultats des analyses (p. ex., spectrogrammes de masse, rapports de concentration) sont exportés et les résultats sont vérifiés (p. ex., exclusion des faux positifs, confirmation de la pureté du Pic).
Iv. Considérations spéciales pour les spectromètres de masse à haute résolution
Optimisation de la résolution: le principal avantage des Spectromètres de masse haute résolution réside dans leur haute résolution, de sorte que cette caractéristique doit être pleinement exploitée lors de l'analyse. Par exemple, les spectromètres de masse à haute résolution sont capables de fournir des mesures de masse plus précises lorsqu'il s'agit de distinguer des composés de masse voisine, ce qui permet une identification précise des composés.
Sensibilité au rapport signal sur bruit: les spectromètres de masse à haute résolution ont généralement une sensibilité élevée, mais il faut toujours faire attention au rapport signal sur bruit lors de l'analyse d'échantillons à faible concentration. Le rapport signal sur bruit peut être amélioré en optimisant les paramètres de l'instrument (p. ex., température de la source d'ions, tension d'ionisation, etc.) et le traitement des échantillons (p. ex., concentration, Purification, etc.).
Entretien et étalonnage: les spectromètres de masse haute résolution d'occasion peuvent avoir des problèmes de performances réduites en raison de leur longue durée d'utilisation, ce qui nécessite un entretien et un étalonnage réguliers. Par exemple, le nettoyage du système d'échantillonnage, le remplacement des composants vieillissants, l'étalonnage de la précision du rapport masse / charge, etc.