Chromatographe liquide de laboratoireL'étalonnage métrologique est un processus qui implique plusieurs aspects, voici les étapes détaillées et les précautions à prendre:

I. conditions environnementales

Avant d'effectuer l'étalonnage métrologique du chromatographe liquide, il faut s'assurer que les conditions environnementales sont conformes aux exigences suivantes:

La température ambiante doit être maintenue à (15 ~ 30) ℃, la température ne varie pas de plus de 3 ℃ pendant l'étalonnage (pour le détecteur d'indice de réfraction différentiel, la température ambiante ne varie pas de plus de 2 ℃).

L'humidité relative intérieure doit être maintenue à (20 ~ 85)%.

Les objets inflammables, explosifs et fortement corrosifs ne doivent pas être stockés dans la pièce.

Il n'y a pas de vibrations mécaniques et d'interférences électromagnétiques importantes et une bonne ventilation.

II. Matières de référence et matériel d’étalonnage

Les substances étalons certifiées au niveau national doivent être utilisées et l'équipement d'étalonnage doit être vérifié métrologiquement comme satisfaisant. Les substances standard couramment utilisées sont:

Substance étalon pour solution de naphtalène - méthanol, évaluée à 1,00 × 10 ^ - 4 g / ML, avec une incertitude étendue inférieure à 4%.

Substance étalon pour solution de cholestérol - méthanol avec une valeur étalon de 200 μg / ML et une incertitude d'étalement inférieure à 2,0%.

Autres substances étalons sélectionnées en fonction des besoins spécifiques d'étalonnage.

L'équipement d'étalonnage peut inclure des pipettes, des bouteilles volumétriques, des thermomètres, etc.

Iii. Étapes de Calibration

1. Calibration du système de perfusion

Résistance à la pression de la pompe: connectez bien les parties de l'instrument, utilisez du méthanol (ou de l'eau pure) comme phase mobile et réglez le débit à 0,2 ml / min. Démarrez l'instrument et maintenez la pression stable pendant 10 minutes, vérifiez les fuites aux interfaces de chaque tuyau. Retirez la colonne de chromatographie et boucher l'extrémité de sortie de la pompe de sorte que la pression atteigne 90% de la valeur maximale admissible, en maintenant pendant 5 minutes pour confirmer l'absence de fuite.

Erreur de réglage du débit de la pompe et stabilité du débit: réglez le débit selon les exigences, démarrez l'instrument et laissez la pression se stabiliser, Collectez la phase mobile à la sortie de la phase mobile avec une bouteille de capacité propre, chronométrez et pesez, calculez le débit mesuré. Répétez l'étalonnage 3 fois pour assurer la précision.

Erreur de gradient: définir la procédure d'élution de gradient, tracer et calculer la courbe de variation de gradient avec le solvant a (par exemple, l'eau) et le solvant B (par exemple, une solution aqueuse contenant 0,1% d'acétone).

2. Erreur de consigne de température de boîte de colonne et correction de stabilité

Placez la sonde du thermomètre numérique dans le thermostat de la colonne chromatographique au même endroit que la colonne chromatographique.

Sélectionnez la température de réglage (par exemple, 35 ° C et 45 ° c), enregistrez les lectures après que la température soit stabilisée et toutes les 10 minutes pour un total de 7.

La différence entre la moyenne et la valeur de consigne est calculée comme erreur sur la valeur de consigne de la température de la colonne et la différence entre le maximum et le minimum des 7 lectures comme stabilité de la température de la colonne.

3. Calibration du détecteur

Prenez le détecteur de lumière visible ultraviolette et le détecteur à matrice de diodes comme exemple, connectez bien les parties de l'instrument, choisissez la colonne chromatographique appropriée et la phase mobile.

Réglez les paramètres de mesure correspondants tels que la longueur d'onde, la sensibilité, etc.

Après stabilisation de la ligne de base, on injecte un volume d'une solution de substance étalon (p. ex., une solution de naphtalène - méthanol de 1,0 × 10 ^ - 4 g / ML), on détermine et on enregistre en continu le temps de rétention et l'aire des pics chromatographiques.

4. Calibrage de précision du volume de l'échantillon entrant (le cas échéant)

Il peut être effectué par des méthodes telles que la méthode d'étalonnage standard, la méthode de pesage, la méthode d'étalonnage à anneau quantitatif ou la méthode de comparaison avec un échantillonneur standard.

Méthode d'étalonnage des étalons: plusieurs échantillons sont prélevés à l'aide d'une solution d'étalon de concentration connue, les valeurs de réponse du pic chromatographique sont enregistrées et la précision du volume de l'échantillon est calculée.

Méthode de pesage: le volume de solvant réellement aspiré est calculé par pesage et comparé au volume fixé.

Méthode d'étalonnage de l'anneau quantitatif: la précision volumique de l'anneau quantitatif est vérifiée, jugée en observant la forme du pic chromatographique et les valeurs de réponse.

Méthode de comparaison avec un échantillonneur Standard: analyse comparative à l'aide d'un échantillonneur standard, calcul de l'écart par rapport au volume de l'échantillon et ajustement.

Iv. Registres et rapports d'étalonnage

Chaque donnée et observation doit être enregistrée en détail pendant l'étalonnage.

Un rapport d'étalonnage doit être rédigé une fois l'étalonnage terminé, y compris des éléments tels que la date d'étalonnage, les conditions environnementales, l'équipement d'étalonnage, les étapes d'étalonnage, l'enregistrement des données et les résultats d'analyse.

Le rapport d'étalonnage doit être vérifié par un professionnel et confirmé par sa signature.

V. précautions

Les pratiques opérationnelles et les spécifications de sécurité doivent être strictement respectées pendant le processus d'étalonnage.

Les substances de référence doivent être utilisées en veillant à ce qu'elles restent valables et à ce qu'elles soient bien conservées.

L'équipement d'étalonnage doit être entretenu et vérifié régulièrement pour en assurer l'exactitude.

L'étalonnage métrologique d'un chromatographe liquide de laboratoire est un processus complexe et délicat qui nécessite des professionnels travaillant dans le strict respect des protocoles opérationnels pour assurer la précision et la fiabilité de l'instrument.