En tant que composant central d'un système de chromatographie liquide haute performance (HPLC), les performances d'une colonne de chromatographie liquide ont un impact direct sur la précision et la répétabilité des résultats analytiques. Après une utilisation à long terme, la surface de la phase stationnaire accumule progressivement des résidus d'échantillon, des cristaux de sels tampons ou des substances fortement retenues, ce qui entraîne un élargissement du pic, une diminution de la séparation et même des anomalies de pression. L'entretien de nettoyage scientifique restaure non seulement l'effet de la colonne, mais augmente également considérablement la durée de vie de la colonne de chromatographie. Vous trouverez ci - dessous des programmes de nettoyage systématiques et des points de fonctionnement pour différents types de pollution.
I. processus de rinçage et de régénération des fondations
1. Méthode d'élution en gradient
- scénarios applicables: polluants organiques conventionnels (p. ex., protéines, POLYPEPTIDES, métabolites de petites molécules).
- Étapes opérationnelles:
① déconnecter le détecteur pour empêcher les impuretés à haute concentration d'entrer dans la cellule de circulation;
② avec méthanol - eau (50: 50, V / v) comme solvant initial, le débit est réglé à 1 / 3 du débit normal (exemple: colonne de chromatographie id de 4,6 mm recommandée 0,8 ml / min);
③ augmentation progressive de la proportion de phase organique à 95% de méthanol, rinçage continu pendant 30 minutes;
④ inverser la ligne de retour, passer à l'acétonitrile pur rinçage à faible vitesse pendant 20 minutes, en utilisant l'effet de déplacement de solvant pour éliminer les impuretés hydrophobes.
- Paramètres clés: pression maximale de tolérance ≤ 30mpa, contrôle de la température en dessous de 40 ℃.
2. Méthode forte d'immersion de solvant
- cible: polymères liposolubles ou contaminants de type résine.
- détails de la mise en œuvre:
Une solution d'Isopropanol contenant 0,1% d'acide trifluoroacétique (TFA) est formulée avec un faible débit (0,2 ml / min) rincé en continu pendant une nuit. L'environnement acide peut favoriser l'ionisation et améliorer la capacité de dissolution des composés alcalins. Notez que cette méthode ne s'applique pas aux colonnes de chromatographie en phase liante autres que les matrices de gel de silice.
II. Stratégies spéciales d’élimination de la pollution
1. Enlèvement de précipitation de sel inorganique
- caractéristiques du phénomène: augmentation du bruit de base, apparition de pics fantômes.
- la solution:
Traitement en deux étapes: ① rincer d'abord à basse pression avec de l'eau désionisée pendant 30 minutes; ② passer à une solution méthanolique aqueuse (pH à 7,0) contenant 0,05 mol / l d'EDTA, chélater les ions métalliques et dissoudre le dépôt de phosphate de calcium. L'exécution de cette procédure une fois par mois peut être efficace pour prévenir les dommages dus à la dialyse.
2. Dissociation par adsorption de macromolécules biologiques
- analyse des points difficiles: les acides nucléiques / protéines sont susceptibles de former une couche d'adsorption irréversible.
- procédés innovants:
Configurez le mélange SDS (Sodium dodécylsulfate) - isopropanol (Fraction massique 0,1%) avec le nettoyage assisté par commotion ultrasonique. La fréquence ultrasonore est choisie à 40 kHz et il convient d'ajuster l'amplitude juste pour générer des bulles de cavitation de l'ordre du micron, à la fois pour décoller la couche d'accrochage et ne pas détruire le squelette en silicone. Une fois terminé, il est nécessaire de remplacer le tensioactif par une grande quantité d'eau pure.
Iii. Traitement d'urgence des conditions de travail spéciales
En cas de blocage important, les moyens non conventionnels suivants peuvent être utilisés:
1. Lavage impulsionnel haute pression inverse
- la colonne de chromatographie est retournée dans le système d'accès, le mode pulsé est réglé (pression de crête jusqu'à 40 MPa, durée < 5 secondes / passe), l'air injecté espacé pousse les particules résiduelles à l'extérieur. Cette méthode n'est utilisée qu'au début de la contamination par les oxydes métalliques, une opération fréquente entraînera l'effondrement du remplissage.
2. Régénération de torréfaction à haute température in situ
- colonne de chromatographie spéciale pour la préparation de charges céramiques résistantes aux hautes températures. La montée en température lente jusqu'à 300°c est maintenue pendant 2 heures pour oxyder l'accumulation de carbone carbonisé. Le processus de refroidissement nécessite un contrôle strict de la vitesse de refroidissement (≤ 5 ℃ / min) pour éviter les fissures de contrainte thermique.
Iv. Protection quotidienne et gestion longue durée
1. Prétraitement avant d'entrer dans l'échantillon
- tous les échantillons doivent être filtrés sur une membrane filtrante de 0,22 µm, un dispositif de protection avec pré - colonne est recommandé pour intercepter les impuretés particulaires. Pour les échantillons de matrice complexes, il est recommandé d'effectuer une purification préliminaire en série de petites colonnes d'extraction en phase solide en ligne.
2. Optimisation des conditions de stockage
- arrêt de courte durée (< 7 jours): conserver dans une solution méthanol - eau (80: 20) scellée aux deux extrémités contre la volatilisation;
- stockage à long terme: chargé d'azote pour créer une atmosphère inerte, placé à l'intérieur du sécheur à l'abri de la lumière pour la conservation. Vérifiez régulièrement les tendances des changements de pression de colonne et établissez un profil de cycle de vie.
3. Application de système de surveillance intelligent
- Équipé d'un capteur de pression pour surveiller en temps réel la pression différentielle à l'importation et à l'exportation, qui déclenche automatiquement la procédure de rinçage lorsque Δp dépasse le seuil d'alerte (généralement 1,5 fois la valeur initiale). En combinaison avec le degré d'atténuation du signal du détecteur UV, l'état d'atténuation de l'effet de colonne est évalué dynamiquement.