L'utilisation et l'entretien corrects de la colonne de chromatographie sont importants, une légère négligence peut réduire l'efficacité de la colonne, réduire sa durée de vie et même l'endommager. Lors des manipulations chromatographiques, les sujets suivants doivent être pris en compte pour maintenir la colonne chromatographique.
① Évitez les changements brusques de pression et de température et tout choc mécanique. Les changements soudains de température ou la chute de la colonne de chromatographie d'une hauteur peuvent affecter l'état de remplissage à l'intérieur de la colonne; Une augmentation ou une diminution soudaine de la pression de la colonne peut également impulser le remplissage interne de la colonne et doit donc être effectuée lentement lors de la régulation du débit, la rotation de la vanne ne pouvant pas être trop lente lors de l'admission de la vanne dans l'échantillon (comme indiqué précédemment).
② doit changer progressivement la composition du solvant, en particulier dans la chromatographie en phase inverse, ne doit pas être changé directement du solvant organique à tout l'eau, et vice versa.
③ en général, la colonne de chromatographie ne peut pas reculer, seulement si le producteur indique que la colonne peut reculer, les impuretés laissées dans la tête de colonne peuvent être éliminées. Sinon, le recul réduira rapidement l'effet de colonne.
④ choisissez d'utiliser une phase active appropriée (en particulier le pH) pour éviter la destruction de la phase stationnaire. Parfois, il est possible de connecter une pré - colonne devant l'échantillonneur, la colonne d'analyse est du gel de silice lié lorsque la pré - colonne est du gel de silice, ce qui peut permettre à la phase active d'être préalablement "saturée" par du gel de silice avant d'entrer dans la colonne d'analyse, évitant ainsi la dissolution de la matrice de gel de silice dans la colonne d'analyse.
⑤ Évitez d'injecter des échantillons complexes de la matrice, en particulier des échantillons biologiques, directement à l'intérieur de la colonne, nécessitant un prétraitement de l'échantillon ou la connexion d'une colonne de protection entre l'échantillonneur et la colonne chromatographique. Les colonnes de protection sont généralement des colonnes courtes remplies de phases stationnaires similaires. Les colonnes de protection peuvent et doivent être remplacées fréquemment.
⑥ la colonne de chromatographie est fréquemment rincée avec un solvant fort, éliminant les impuretés conservées à l'intérieur de la colonne. Lors du nettoyage, le remplacement de la phase active dans le système de chemin de convection doit être progressivement transformé en solvant miscible à la phase, le volume de chaque phase active doit être environ 20 fois le volume de la colonne, c'est - à - dire que l'analyse conventionnelle nécessite 50 ~ 75 ml.
Quelques solvants et séquences de lavage des colonnes de chromatographie sont énumérés ci - après à titre de référence: les colonnes de gel de silice sont rincées successivement au naphtane (ou heptane), au dichlorométhane et au méthanol, puis dans l'ordre inverse, tous les solvants devant être rigoureusement déshydratés. Le méthanol peut être lavé aux impuretés polaires fortes résiduelles et l'alcane réactive la surface du gel de silice. La colonne en phase inverse est rincée successivement à l'eau, au méthanol, à l'acétonitrile, au monochlorure de méthylène (ou chloroforme) puis dans l'ordre inverse. Si la phase active utilisée pour l'analyse suivante ne contient pas de tampon, cette étape peut être rincée à l'eau après l'omission de zui. Le monochlorure de méthylène peut être lavé aux impuretés non polaires résiduelles, des injections répétées de 100 à 200 μl de Tétrahydrofurane pendant le rinçage au méthanol (acétonitrile) aident à éliminer les impuretés fortement hydrophobes. Les solutions mixtes de tétrahydrofuranne avec de l'acétonitrile ou du méthanol éliminent les lipides. Parfois, le diméthylsulfoxyde est également injecté plusieurs fois. De plus, l'élution avec un gradient d'acétonitrile, d'acétone et d'acide trifluoroacétique (0,1%) permet d'éliminer la contamination protéique.
La colonne d'échange cationique peut être rincée avec un tampon acide dilué et la colonne d'échange anionique peut être rincée avec un tampon alcalin dilué, à l'exclusion des sels ayant de fortes propriétés d'échange, puis rincée successivement avec de l'eau, du méthanol, du Dichlorométhane (à l'exclusion des matières organiques adsorbées à la surface de la phase stationnaire), du méthanol, de l'eau.
⑦ lors de la préservation de la colonne de chromatographie doit être rempli d'acétonitrile ou de méthanol à l'intérieur de la colonne, le joint de la colonne à serrer pour empêcher le solvant de se volatiliser et de sécher. Il est interdit de laisser la solution tampon à l'intérieur de la colonne pendant une nuit ou plus.
⑧ au cours de l'utilisation de la colonne de chromatographie, si la pression augmente, un type de filtre fritté peut être bloqué, à ce moment - là, le filtre doit être remplacé ou retiré pour le nettoyage; Une autre possibilité est que de grosses molécules entrent à l'intérieur de la colonne pour que les têtes de colonne soient contaminées; Si l'efficacité de la colonne diminue ou si le pic chromatographique se déforme, il peut y avoir un effondrement de la tête de colonne et une augmentation du volume mort.
Dans ces deux derniers cas, Dévissez soigneusement le joint de la colonne, utilisez un petit acier propre pour retirer le remplissage de la tête de colonne de 1 à 2 mm de hauteur (attention à nettoyer le remplissage contaminé) et niveler le remplissage à l'intérieur de la colonne. La colonne de chromatographie est ensuite remplie d'une phase stationnaire humidifiée par un solvant approprié (identique à l'intérieur de la colonne), aplatie et les joints de colonne sont à nouveau serrés. L'efficacité de la colonne est améliorée après ce traitement, mais il est difficile de revenir au niveau de la nouvelle colonne.