Les facteurs affectant la performance de la colonne de chromatographie sont:I. facteurs physiques:
(1) pureté du gel de silice: pureté du gel de silice et concentration d'ions métalliques résiduels, les impuretés du gel de silice affecteront la forme de crête du composé, la teneur élevée en métal de la surface du gel de silice affectera la forme de crête du composé alcalin, facile à glisser.
(2) La longueur et le diamètre intérieur du lit de remplissage de la taille de la colonne de chromatographie, l'augmentation de la longueur de la colonne de chromatographie, peut améliorer l'effet de la colonne dans une certaine mesure, mais aussi augmenter la pression et provoquer l'élargissement du pic; Large diamètre de la colonne, améliore la charge d'échantillon, mais augmente également la diffusion latérale, ce qui entraîne également un élargissement du pic. Un diamètre de colonne étroit permet d'économiser le solvant et peut réduire la diffusion latérale, mais la pression est plus élevée et les exigences du système sont plus élevées.
(3) haute efficacité, bonne reproductibilité, structure uniforme du lit de colonne, structure irrégulière du lit de colonne, vitesse inégale de la ligne de phase d'écoulement, élargissement facile de la bande spectrale; Diamètre moyen des particules, plus la taille des particules est petite, plus l'effet de la colonne est élevé et plus la pression de la colonne est élevée. Plus la distribution granulométrique est large, plus l'effet de la colonne est faible et plus la pression est élevée.
(4) surface des particules: la somme de la surface extérieure et de la surface des pores internes des particules, exprimée en m2 / G, la surface relativement élevée a une forte capacité de rétention de l'échantillon, une plus grande capacité de la colonne et un degré de séparation. Et la faible surface peut atteindre l'état d'équilibre plus rapidement, plus approprié pour le Programme d'élution de gradient.
(5) taille des pores: taille moyenne des pores ou des cavités des particules, allant de 80 à 300? Les particules de remplissage à grande taille de pore peuvent prolonger le temps de rétention du soluté macromoléculaire à la surface du remplissage et améliorer la séparation, de sorte que le remplissage à grande taille de pore convient à la séparation des composés macromoléculaires ou des molécules de plus grand volume hydrodynamique.
II. Facteurs chimiques:
(1) type de liaison et phase de liaison: les molécules de la phase de liaison sont liées à un seul point de la matrice pour la liaison monomère, ce type de liaison peut améliorer le taux de transfert de masse et réduire le temps d'équilibre de la colonne; Le polymère est lié en tant que molécule de phase de liaison liée à la matrice multipoint, ce type de liaison peut augmenter la stabilité de la colonne chromatographique, augmenter la charge d'échantillon. Alors que la phase de liaison différente affecte directement le comportement de rétention du composé.
(2) Couverture carbone: une couverture carbone élevée peut améliorer la résolution et la reproductibilité, mais le temps d'analyse est long.
(3) Fermeture: il y a des groupes hydroxyles de silice résiduels partiellement non scellés dans la charge de phase de liaison de gel de silice, tels que la fermeture de la figure peut atténuer la réaction des composants à tester avec les groupes hydroxyles de silice acides résiduels à la surface du gel de silice, améliorer la rétention et Le Mouvement de crête, ce qui est particulièrement important pour les composés alcalins. Différentes techniques de fermeture affectent également directement l'efficacité de la colonne de chromatographie.