La performance de la colonne chromatographique, en tant que composant central de la séparation chromatographique, détermine directement la précision et la répétabilité des résultats analytiques. L'entretien scientifique peut considérablement prolonger l'effet de la colonne, réduire la fréquence des défaillances, et les points suivants sont systématiquement énoncés à partir des spécifications d'utilisation, de l'entretien propre et de la gestion du stockage:

I. strictement suivre les conditions limites d'utilisation

Contrôle du pH

Les charges matricielles en gel de silice tolèrent une plage de pH limitée (en général), au - delà de laquelle une chute hydrolytique de la phase de liaison peut se produire. Le pH de la phase mobile doit être strictement contrôlé et une colonne spéciale résistante aux alcalis (par exemple une matrice polymère) doit être choisie si nécessaire.

Exemple: l'analyse des composés acides privilégie un système salin tamponné au pH qui évite l'apport direct d'acide pur.

Contrôle de la pression et du débit

Évitez le fonctionnement prolongé de surpression (≤ la valeur de la pression maximale), la pression élevée peut facilement accélérer l'effondrement de remplissage; Augmenter progressivement la pression aux conditions de travail lors de l'utilisation initiale pour éviter les chocs soudains endommageant la structure du lit de colonne.

Le réglage du débit ne doit pas dépasser la valeur recommandée (), le débit élevé réduit le temps d'analyse, mais aggrave l'usure du remplissage et réduit le nombre de plateaux théoriques.

Gestion de la température

Les températures élevées améliorent la séparation des composants complexes, mais les températures élevées à long terme (> 60 ° c) Accélèrent la perte de liquide fixe. Il est recommandé d'augmenter la température de la colonne uniquement si nécessaire et de ne pas dépasser 5°C / min par montée en température.

II. Programme de régénération par nettoyage périodique

Procédure de rinçage conventionnelle

Une fois l'analyse quotidienne terminée, les contaminants hydrophobes sont rincés d'abord avec un faible débit de la phase mobile initiale pendant 30 minutes, puis avec une solution aqueuse contenant 5 à 10% d'acétonitrile.

Les impuretés difficiles à laver peuvent être lavées avec un gradient: passage progressif d'une phase aqueuse élevée à une phase organique élevée, élimination des résidus par changement de polarité du solvant.

Technologie de régénération profonde

Rinçage à basse vitesse des solutions formulées à partir d'agents tensioactifs non ioniques tels que le Tween - 20 lorsque les contaminants liposolubles s'accumulent;

La contamination par chélate métallique peut être éluée en ligne par une solution d'EDTA 0,01 m (pH = 3);

Les substances fortement retenues peuvent être essayées avec un solvant mixte méthanol - acétonitrile - dichlorométhane pour le rinçage inverse, sous réserve de la confirmation de la compatibilité des charges.

Avertissement opérationnel contre - indiqué

Le rinçage direct de la colonne de chromatographie à queue non scellée à l'aide d'un acide fort tel que l'acide chlorhydrique / phosphorique est interdit;

Évitez de nettoyer la colonne de remplissage par commotion ultrasonique, ce qui peut provoquer un relâchement du remplissage.

Normalisation des processus de stockage et d'activation

Stockage à court terme (1 mois)

Remplacement par un liquide conservateur acétonitrile / méthanol (95: 5) inhibant la croissance microbienne; Stockage suspendu verticalement pour éviter la sédimentation inégale du remplissage.

Redémarrer les étapes d'activation

Après avoir éliminé le liquide résiduel de l'extrémité avant, équilibrez d'abord avec la phase mobile initiale pendant 2 heures, puis Vérifiez la récupération de l'effet de la colonne avec les normes d'échantillonnage. En cas d'anomalie du facteur de traînée, répétez le processus de régénération.

La durée de vie d'une colonne de chromatographie peut être prolongée par l'établissement d'un code d'exploitation normalisé (SOP) et l'évaluation régulière de l'efficacité de la colonne (par exemple, le test USP du nombre de plaques théoriques). Lorsque le nombre théorique de plateaux tombe en dessous de la valeur initiale de 70%, les anciennes colonnes doivent être éliminées à temps pour éviter d'affecter la fiabilité des données. Les intrants scientifiques peuvent réduire considérablement le coût d'une seule analyse et améliorer l'efficacité globale du laboratoire.