En tant que composant central du système d'analyse chromatographique, le choix de la colonne a un impact direct sur l'efficacité de séparation, la précision analytique et le cycle de développement de la méthode. Les points clés des colonnes de chromatographie d'achat sélectionnées sont exposés ci - dessous à partir de plusieurs dimensions:

I. clarifier les besoins expérimentaux et les objectifs analytiques

- positionnement à des fins analytiques

- l'analyse qualitative nécessite un degré élevé de séparation et d'effet de colonne, la préférence étant donnée aux colonnes de chromatographie avec un nombre élevé de plateaux théoriques;

- l'analyse quantitative est axée sur la répétabilité et la stabilité, et les modèles avec une bonne reproductibilité entre lots doivent être sélectionnés;

- la préparation de la chromatographie nécessite une charge d'échantillon élevée, une colonne de chromatographie avec un grand diamètre intérieur (par exemple, plus de 10 mm), une charge de grande taille de particules est recommandée.

- adaptation des propriétés de l'échantillon

- composés non / faiblement polaires: colonnes C18 ou C8 en phase inverse;

- composés fortement polaires: colonne en phase normale ou colonne en phase inverse modifiée polairement en option;

- substances de type ionique: utilisation d'une colonne de chromatographie échangeuse d'ions;

- biomacromolécules: exclusion dimensionnelle ou colonne de gel dédiée nécessitant de grandes pores (≥ 300 Å).

II. Évaluation des principaux paramètres de performance

- Optimisation des paramètres physiques

- longueur de la colonne par rapport au diamètre intérieur: l'analyse de routine est couramment utilisée 150 mm × 4,6 mm, les échantillons complexes peuvent être prolongés jusqu'à 250 mm pour améliorer la séparation, mais il est nécessaire de peser la pression de la colonne par rapport au coût du temps;

- taille des particules de remplissage: 5 μm pour HPLC conventionnel, jusqu'à 3,5 μm adapté à la phase liquide ultra - haute performance (UPLC), la réduction de la taille des particules peut améliorer l'efficacité de la colonne mais augmenter la contre - pression;

- choix des tailles de pores: 80 - 120 Å pour les petites molécules (< 1000 DA) et plus de 300 Å pour les grandes molécules (p. ex. protéines) pour assurer la liberté de diffusion.

- indicateurs de performance chimique

- pureté du gel de silice: le gel de silice de haute pureté réduit le glissement des composés alcalins dû aux impuretés métalliques;

- processus de liaison: le transfert de masse de liaison monomère est rapide et la stabilité de liaison de polymérisation est élevée; La couverture de carbone affecte la capacité de rétention et la forte charge en carbone convient aux substances non polaires;

- traitement de fermeture: réduit les interférences silico - Hydroxyles résiduelles et améliore la forme du pic de composé polaire.

Iii. Instruments correspondants et conditions de fonctionnement

- vérification de la compatibilité des appareils

- chromatographe liquide: vérifier si la résistance maximale à la pression de la pompe est conforme aux exigences de la colonne de petite taille;

- chromatographe en phase gazeuse: doit vérifier l'étanchéité de l'entrée de l'échantillon et la précision du contrôle de la température du réservoir de la colonne].

- phase mobile et plage de pH

- colonne de matrice en silicone: la plage de tolérance de pH standard est de 2 à 8 et peut être étendue à 1 à 12 après des modifications spéciales;

- colonne polymère: grande adaptabilité au pH (1 - 14), mais attention aux problèmes de gonflement causés par les solvants organiques.

Iv. Rapport qualité - prix et maintenance à long terme

- analyse coûts - avantages

- colonne haute performance: Bien que le prix unitaire soit élevé, mais avec une longue durée de vie et une efficacité de séparation élevée, il convient à la détection à haute fréquence;

- mécanisme d'essai: Évitez l'achat aveugle en testant l'effet de séparation réel avec de petits échantillons fournis par le fournisseur.

- conception de la facilité d'entretien

- contrôle de la pollution: choisissez des charges facilement lavables (par exemple des particules sphériques) et rincez - les régulièrement avec un solvant fort;

- mode de stockage: la désactivation à court terme peut être trempée dans la conservation des alcools, l'inactivité à long terme nécessite un stockage sec et scellé.

V. Éviter les erreurs courantes

- rejet du "monobrandisme": les colonnes domestiques ont réalisé une substitution à l'importation dans certains domaines, en comparant les paramètres plutôt qu'en regardant simplement l'origine;

- Méfiez - vous des pièges "universels à colonne unique": les colonnes du même type (par exemple C18) peuvent donner des résultats très différents en raison de différences dans le processus de collage et doivent être examinées de manière ciblée.