La colonne de chromatographie inverse peut rencontrer plusieurs défauts lors de son utilisation, voici les solutions pour ces défauts:

I. augmentation anormale de la pression

1. Blocage de la plaque d'écran

- performance: la pression de la colonne augmente ou fluctue considérablement.

- solution: Retirez la plaque de tamis, placez - la dans de l'acide nitrique dilué à 10% pour le nettoyage par ultrasons pendant 10 minutes et réinstallez - la après un rinçage à l'eau pure. Le rinçage inverse avec un solvant fort est également possible. Faites attention à éviter les chocs à haute pression avant.

2. Contamination de remplissage

- manifestation: le remplissage de la tête de colonne est recouvert d'une substance fortement retenue, ce qui entraîne une diminution de l'efficacité de la colonne.

- solution: dévisser le joint de colonne, creuser le remplissage contaminé de la peau, le remplacer par un nouveau remplissage et le compacter. Cette méthode restaure partiellement l'effet de colonne, mais il est difficile d'atteindre le nouveau niveau de colonne.

3. Cristallisation du sel

- manifestation: lorsque la phase mobile contient une forte concentration en solvant organique, la cristallisation du sel tampon obstrue la voie d'écoulement.

- solution: dissoudre d'abord le sel avec une faible concentration de méthanol / eau, puis passer à une concentration élevée de phase organique pour le rinçage.

II. Diminution de l'effet de séparation

1. Anomalie de crête

- traîne / fourche: en raison de l'effondrement du poteau ou de l'augmentation du volume mort, le remplissage du même modèle est nécessaire et aplati. En cas de contamination métallique, utilisez plutôt une colonne de silicone de haute pureté.

- Ghost Peaks: les contaminants résiduels s'écoulent à haute température et peuvent être éliminés en augmentant la température finale de la colonne de chromatographie de cuisson.

2. Effet de colonne réduit

- causes: perte de phase stationnaire ou dissolution du gel de silice.

- solution: optimisez le pH de la phase mobile (recommandé 2 ~ 9), évitez les conditions alcalines pour accélérer l'hydrolyse de la phase de liaison.

Iii. Dérive du temps de rétention

1. équilibre insuffisant: au moins 10 ~ 20 fois le volume de la colonne est équilibré après le remplacement de la phase mobile.

2. Effondrement hydrophobe: le fonctionnement à long terme de la phase aqueuse de la colonne C18 entraînera une contraction des pores, nécessitant une injection de 5% de phase organique pour récupérer.

Iv. Stratégie de maintenance préventive

1. Normaliser le processus opérationnel

- Évitez les brusques changements de pression, la vanne d'ouverture doit être lente.

- la commutation de phase mobile nécessite une transition de gradient et interdit le passage direct de la phase organique à la phase aqueuse pure.

2. Nettoyage en profondeur régulier

- rinçage conventionnel: rinçage séquentiel avec 95% d'eau - 5% de méthanol → méthanol pur → Isopropanol, au moins 10 fois le volume de la colonne par solvant

- contaminants tenaces: le DMSO est choisi pour les résidus de protéines, les amidons sont élués avec de l'eau.

3. Optimisation des conditions de stockage

- lorsqu'il n'est pas utilisé pendant une longue période, la colonne est pleine de méthanol ou d'acétonitrile, le serrage des joints empêche le séchage [^ 2 ^]. Il est interdit de retenir le tampon pendant la nuit.

La résolution des défaillances de la colonne de chromatographie inverse nécessite une combinaison de rinçage physique, de régénération chimique et de spécifications opérationnelles. Priorité est donnée à l'exclusion des facteurs d'origine non - colonne (tels que le blocage de l'instrument) et le traitement de la colonne de chromatographie elle - même problème est re - ciblé. L'établissement d'un journal de maintenance complet qui enregistre les conditions de chaque rinçage, les variations de pression et les résultats des tests peut prolonger considérablement la durée de vie de la colonne.