Le Nucleic Acid Protein Assay est un équipement clé utilisé dans les laboratoires de biologie moléculaire pour quantifier rapidement les concentrations d'acides nucléiques (ADN / ARN) et de protéines. Le bon fonctionnement garantit non seulement la précision des données, mais prolonge également la durée de vie de l'instrument. Cet article présente les spécifications de fonctionnement de base, les questions fréquemment posées et les conseils pratiques du Nucleic Protein Assay pour les débutants en laboratoire.
I. préparation avant l'opération
1. Calibration des instruments
- Étalonnage à blanc: Avant chaque utilisation, il est nécessaire d'effectuer un étalonnage à blanc avec de l'eau ultra pure ou un tampon tel que le tampon te pour éliminer les interférences de fond.
- entretien régulier: si l'instrument n'a pas été utilisé pendant une longue période, il est nécessaire de le recalibrer et de vérifier que la source lumineuse, le détecteur sont OK.
2. Préparation des échantillons
- Échantillons d'acides nucléiques: Assurez - vous qu'il n'y a pas de particules ou d'impuretés et si nécessaire, faites une centrifugation (12 000 tr / min, 1 - 2 min) pour éliminer les impuretés.
- Échantillons de protéines: Évitez les agents de décontamination à forte concentration (comme le SDS) au cas où cela affecterait la détection de l'Absorbance.
3. Choisissez le mode de détection approprié
- Méthode d'absorption UV (par exemple NanoDrop): convient pour le dosage rapide de l'ADN / ARN (260 nm) et des protéines (280 nm).
- méthode de fluorescence (par exemple qubit): convient pour la détection d'acides nucléiques à faible concentration avec une sensibilité plus élevée.
II. Processus opérationnel standard
1. Démarrage et initialisation
- Allumez l'instrument et préchauffer pendant 5 - 10 minutes (certains appareils doivent être préchauffés plus longtemps).
- sélectionner le mode de détection correspondant (acide nucléique / protéine).
2. Dosage et détection
1. Plate - forme d'inspection propre: tremper une petite quantité d'eau ultra pure ou d'éthanol avec du papier sans poussière pour essuyer la surface d'inspection et éviter la contamination résiduelle.
2. échantillon supplémentaire:
- instruments de type NanoDrop: ajouter goutte à goutte 1 - 2 µl d'échantillon à la table d'essai et déposer le bras d'essai.
- instruments de type boîte colorimétrique: Assurez - vous que la boîte colorimétrique est propre, ajoutez la bonne quantité d'échantillon (généralement 50 - 200 µl).
3. Lecture: cliquez sur "mesure", enregistrez les données.
4. Nettoyage: immédiatement après l'essai, nettoyez la table d'essai avec de l'eau ultra pure ou de l'éthanol pour empêcher la cristallisation de l'échantillon d'affecter l'essai ultérieur.
3. Enregistrement et analyse des données
- jugement de pureté des acides nucléiques:
- ADN: a260 / A280 ≈ 1,8 (ADN pur), a260 / A230 > 2,0 (aucun contaminant).
- ARN: a260 / A280 ≈ 2,0 (ARN pur).
- si le rapport est anormal (par exemple a260 / A280 < 1,6), il peut suggérer une contamination par des protéines ou des phénols.
- Dosage des protéines: lorsque vous utilisez la méthode Bradford ou BCA, vous devez faire une courbe standard.
Iii. Questions fréquemment posées et solutions
1. Résultats de détection anormaux (par exemple, rapport a260 / A280 faible)
- causes possibles: contamination par des protéines ou des solvants organiques.
- solution: Re - purifier l'échantillon ou passer à une méthode quantitative par fluorescence (par exemple qubit).
2. Instruments mal notés (par exemple "sampletooconcentrated")
- cause probable: la concentration de l'échantillon est hors de la plage de détection.
- solution: Re - détection après dilution de l'échantillon.
3. Dérive ou instabilité de base
- causes possibles: contamination de la table de détection ou vieillissement de la source lumineuse.
- solution: nettoyez la table d'inspection ou contactez un ingénieur pour calibrer la source lumineuse.
Iv. Techniques pratiques
1. Évitez les interférences de bulles: Assurez - vous que les gouttelettes sont complètes et sans bulles lors de l'ajout, sinon cela entraînera des fluctuations d'Absorbance.
2. Détection d'échantillon à faible concentration:
- quantification par fluorescence (par exemple qubit), plus sensible que la méthode UV.
- si la méthode UV doit être utilisée, le volume de l'échantillon peut être augmenté de manière appropriée (par exemple 2 µl → 3 µl).
3. Recommandations de stockage à long terme:
- mise sous tension au moins une fois par semaine pour éviter l'humidité des éléments optiques.
- stocker dans un environnement sec et sans poussière.