La colonne chromatographique est le composant central de l'analyse chromatographique et ses performances affectent directement l'efficacité de la séparation et la précision des résultats de détection. Un entretien raisonnable peut prolonger la durée de vie de la colonne de chromatographie et éviter une dégradation des performances ou des dommages causés par une mauvaise manipulation. Ce qui suit est un guide détaillé sur la conservation des colonnes de chromatographie, couvrant de nombreux aspects tels que l'installation, l'utilisation, le stockage et l'entretien.

I. préparation avant l'installation

1. Vérification de l'apparence

- la nouvelle colonne de chromatographie doit vérifier que le corps de la colonne est intact avant utilisation, sans fissures, rayures ou phénomènes de fuite.

- Confirmez que le joint de la colonne correspond à l'instrument, évitez les fuites ou les dommages causés par un filetage non conforme.

2. Essai de compatibilité de phase mobile

- avant utilisation, rincer la colonne de chromatographie avec un solvant de faible viscosité, tel que le méthanol ou l'acétonitrile, en excluant les impuretés résiduelles du processus de production.

- tester la compatibilité de la phase mobile avec la colonne chromatographique en évitant l'utilisation d'acides forts, de bases fortes ou de solvants agressifs (par exemple, TFA doit être utilisé avec prudence).

3. Adaptation du système

- Assurez - vous que la valeur de résistance à la pression de la colonne de chromatographie correspond à la pression du système d'instrumentation et évitez l'effondrement du lit de la colonne résultant d'un fonctionnement en surpression.

- Enregistrer le modèle de la colonne de chromatographie, les spécifications (par exemple, la taille des particules, le diamètre des pores, la couverture C18, etc.), en utilisant strictement les conditions recommandées par le fabricant.

II. Entretien dans l'utilisation quotidienne

1. Sélection et gestion de la phase mobile

- contrôle du pH: les colonnes de chromatographie en phase inverse (telles que la colonne C18) conviennent pour une plage de pH de 2 à 8, au - delà de laquelle la matrice de gel de silice peut être détruite.

- proportion de solvant organique: éviter les variations drastiques de la proportion de solvant organique dans la phase mobile (par exemple, le passage direct de 100% d'eau à 100% de solvant organique) avec des transitions de gradient nécessaires pour éviter le rétrécissement ou l'expansion du lit de colonne.

- filtration et dégazage: la phase mobile doit être filtrée sur une membrane filtrante de 0,22 μm et dégazée par ultrasons pour éviter que de minuscules particules ne bloquent le lit de la colonne ou que des bulles d'air interfèrent avec la détection.

2. Traitement avant échantillon

- les échantillons doivent être centrifugés ou filtrés (membrane filtrante de 0,22 µm) pour éliminer les particules en suspension ou les précipités.

- Évitez de prélever directement des échantillons à forte concentration dilués dans la plage de capacité de la colonne (en référence aux paramètres de charge fournis par le fabricant).

- les échantillons complexes recommandent l'utilisation d'une colonne de protection (Guard column) qui intercepte les impuretés et prolonge la durée de vie de la colonne principale.

3. Contrôle du débit et de la pression

- fonctionne strictement selon le débit recommandé pour la colonne de chromatographie, un débit trop élevé peut entraîner une surpression de la colonne et accélérer l'usure de la charge.

- le débit régulier de la colonne en phase inverse est de 0,5 à 2 ml / min et le débit de la colonne de chromatographie liquide ultra haute performance (uhplc) peut être aussi bas que 0,1 à 0,5 ml / min.

- en cas d'augmentation soudaine de la pression du système, arrêt immédiat pour vérifier la cause (par exemple, colmatage de la tête de colonne ou contamination de la plaque d'écran).

4. Rinçage et nettoyage

- après chaque utilisation, rincer la colonne de chromatographie avec de l'eau pure ou un solvant de faible viscosité, tel que le méthanol, pendant 10 à 20 minutes pour éliminer les échantillons résiduels ou les sels.

- après une utilisation prolongée, les opérations de régénération de la colonne (par exemple, le recul, le nettoyage à haute température ou la régénération chimique) peuvent être effectuées pour restaurer l'effet de la colonne.

Iii. Stockage et conservation

1. Stockage à court terme (quelques jours à quelques semaines)

- colonne de chromatographie en phase inverse: conservée avec du méthanol - eau (1: 1) ou du méthanol pur pour éviter que le séchage ne provoque la fissuration de la charge.

- colonne de chromatographie en phase normale: conservée avec du N - hexane ou du chloroforme pour éviter la défaillance de l'absorption d'eau.

- la température de stockage est la température ambiante, éviter les environnements congelés ou chauds.

2. Stockage à long terme (plus de 1 mois)

- retirer la colonne de chromatographie de l'instrument et sceller les deux extrémités contre les taches.

- conserver dans un endroit frais et sec, vérifier régulièrement l'étanchéité et empêcher la volatilisation du solvant de provoquer la fissuration sèche du lit de la colonne.

Iv. Régénération et restauration des colonnes

1. Opération de recul

- convient pour les cas où l'efficacité de la colonne diminue mais n'échoue pas complètement, réarranger le remplissage par rinçage inverse, rétablir l'uniformité du lit de la colonne.

- le débit de recul doit être inférieur au débit avant (par exemple 0,2 ml / min) et le temps est contrôlé à 10 - 30 minutes.

2. Régénération chimique

- colonne de matrice en silicone: peut être immergé dans une solution de méthanol à 10% et nettoyé aux ultrasons pour éliminer les impuretés hydrophobes.

- colonne de polymère: très résistant et recyclable par rinçage avec une forte concentration de solvants organiques tels que l'acétonitrile pur.

3. Régénération à haute température

- convient pour les colonnes de chromatographie résistant à haute température (par exemple, colonne C18), augmenter la température de la colonne à 50 - 60 ° C, rincer au méthanol, dissoudre les impuretés liposolubles adsorbées sur la charge.

V. Questions fréquemment posées et réponses

1. Augmentation de la pression de la colonne

- causes: colmatage de la tête de colonne, contamination de la plaque de tamis ou effondrement du remplissage.

- solution: rincer la tête de colonne à l'envers, remplacer la plaque de tamis ou régénérer la colonne de chromatographie.

2. La forme de crête s'élargit ou glisse la queue

- causes: vieillissement des charges, résidus de sites actifs ou mauvais pH de la phase mobile.

- solution: ajustement du pH de la phase mobile, régénération de la colonne chromatographique ou remplacement d'une nouvelle colonne.

3. Temps de rétention dérive

- causes: modification de la composition de la phase mobile, fluctuations de la température de la colonne ou défaillance partielle du garnissage.

- solution: vérification de la proportion de phase mobile, stabilisation de la température de la colonne, régénération ou remplacement de la colonne chromatographique si nécessaire.

Vi. Précautions

1. Évitez l'entrée de bulles d'air: les bulles d'air peuvent détruire la structure du lit de colonne, ce qui entraîne une augmentation du vide de remplissage et affecte l'effet de séparation.

2. Désactiver les solvants incompatibles: par exemple, le tétrahydrofuranne (THF) peut dissoudre la matrice de gel de silice, utilisez - la avec prudence.

Enregistrement du Journal d'utilisation: Suivez le nombre d'utilisations de la colonne de chromatographie, le type d'échantillon et les opérations de maintenance pour faciliter la prédiction de la durée de vie.