1、Utilisation:

La colonne d'immunoaffinité permet d'adsorber sélectivement l'Ochratoxine a dans le liquide de l'échantillon de produit pharmaceutique, jouant ainsi un rôle de purification très ciblé sur l'échantillon, et le liquide de l'échantillon après purification de la colonne peut être directement utilisé pour l'analyse HPLC ou pour la détection par LC - MS / MS après dissolution par soufflage d'azote.

2、Résumé:

L'Ochratoxine a (ohratoxina, OTA), un métabolite toxique produit par certaines souches des genres Aspergillus et Penicillium, est une mycotoxine qui possède une forte toxicité rénale et hépatique et qui est tératogène, mutagène et cancérogène.

3、Principe:

La base de l'essai est l'antigène, la réaction d'anticorps, l'anticorps est fixé dans la colonne, l'échantillon a été extrait, filtré, lentement à travers la colonne d'immunoaffinité Ochratoxine a, dans laquelle l'endotoxine immunoaffinité est liée à l'anticorps, après quoi la colonne d'immunoaffinité est lavée pour éliminer d'autres substances non apparentées qui n'ont pas été liées. L'Ochratoxine a est éluée au méthanol puis injectée dans un instrument d'analyse pour détection.

4、Composition de l'emballage:

Chaque boîte contient différentes spécifications de colonnes d'immunoaffinité Ochratoxine a et 1 manuel d'instructions.

5、Matériel nécessaire mais non fourni dans la boîte:

5.1 matériel et consommables

--- HPLC/LC-MS/MS

- - - - cadre d'opération de contrôle d'air

- - - - pompes à air

- - - - balance

- - - - homogénéisateur à grande vitesse (vitesse de rotation ≥ 10 000 / min) ou Shaker

- - - - broyeur

- - - - tamis à échantillon

- - - - cylindre de mesure: 100ml / 10ml

- - - - seringue: 20ml

- - - - Pipette ou pipette: 1 mL

- - - - tasse homogénéisée (ou bouteille à cône bouché de 250 ml)

----- flacon d'échantillon

----- bouteille de mesure

5.2 réactifs

- - - - méthanol (ch₃OH): analytiquement pur pour le processus d'extraction / chromatographiquement pur pour le processus d'élution

- - - - chlorure de sodium (NaCl): analytiquement pur

- - - - acide chlorhydrique (HCl): analytiquement pur

- - - - hydroxyde de sodium (NaOH): analytiquement pur

- - - - Hydrogénophosphate disodique (nah₂PO₄): analyse pure

- - - - Dihydrogénophosphate de potassium (Kh₂PO₄): analyse pure

- - - KCl: analytiquement pur

- - - - Tween - 20 (C₅₈H₁₁₄O₂₆): analyse pure

- - - - eau (h₂O): eau distillée ou désionisée

6、Précautions:

- - - - avant utilisation, la colonne d'immunoaffinité doit être ramenée à la température ambiante (22 ~ 25 ℃).

- - - - colonne d'affinité 2 ~ 8 ℃ stockage, ne doit pas être congelé.

- - - - Veuillez utiliser la colonne d'immunoaffinité pendant la date de validité.

- - - - le liquide à l'intérieur de la colonne d'affinité doit être vidé puis soumis à l'opération d'échantillonnage supérieur.

- - - - quantité d'échantillon: selon les besoins, la quantité d'échantillon peut être augmentée ou diminuée de manière appropriée, Notez que la quantité de liquide extrait doit être modifiée en conséquence.

- - - - capacité de la colonne: la capacité de la colonne est de 200 ng, lorsque le contenu de la toxine à examiner dans l'échantillon divisé par le multiple de dilution est supérieur à la capacité de la colonne, il est nécessaire de réduire correctement le volume du liquide de l'échantillon supérieur, re - détection.

- - - ph: le pH de la solution supérieure de la colonne d'affinité doit être compris entre 6 et 8, si vous vous éloignez de cette plage, vous devez ajuster le pH avec de l'acide chlorhydrique ou de l'hydroxyde de sodium.

- - - - le solvant au moment de la détection de l'appareil reste cohérent avec la phase mobile peut éliminer l'effet de l'effet du solvant.

- - - - l'Ochratoxine peut causer le cancer et doit être manipulée avec des outils de protection tels que des masques à gants.

- - - - les contenants usagés et les solutions standard sont trempés pendant une nuit dans une solution d'hypochlorite de sodium (5% V / v).

7、Formulation du liquide d'essai:

7.1 liquide d'extraction

Solution à 70% méthanol - eau (V méthanol: v eau = 70: 30): prendre 700 ml de méthanol et ajouter de l'eau désionisée pour ajuster la capacité à 1 L.

7.2 Solution tampon phosphate (Abréviation: PBS)

Peser 8,00 g de chlorure de sodium, 1,20 g d'Hydrogénophosphate disodique (ou 2,92 g d'Hydrogénophosphate disodique dodécahydraté), 0,20 g d'Hydrogénophosphate de potassium, 0,20 g de KCl, dissoudre avec 900 ml d'eau, ajuster le pH à 7,0 ± 0,1 avec de l'acide chlorhydrique et diluer à 1000 ml avec de l'eau.

7.3 tampon Phosphate - Tween (Abréviation: pbst)

Prendre 1 ml de Tween - 20 et diluer le tampon PBS à 1000 ml.

8,Traitement des échantillonsPour:

- - - 3 g ± 0,01 g d'échantillon (l'échantillon solide doit être pulvérisé et passé sur un tamis de 2 mm), 3 g de chlorure de sodium dans un flacon homogénéisé, ajouter 60 ML de liquide d'extraction (voir 7.1);

- - - - homogénéisation à grande vitesse (≥ 10 000 R / min) 2 min;

- - - - centrifuger 10 min (8000 R / min);

- - - - prendre 5 ml de surnageant dans un flacon doseur de 50 ml, diluer à l'échelle avec du tampon PBS, mélanger et centrifuger pendant 15 min (8000 tr / min);

- - - - prélever 20 ml de surnageant purifié par colonne de surimmunoaffinité.

Multiple de dilution: 10

9、Procédure opérationnelle:

9.1 exemple supérieur

- - - - retirer la colonne d'immunoaffinité et faire pénétrer l'extrémité inférieure de la cartouche de seringue directement dans la colonne d'affinité

Un bouchon carré, complétant la connexion du corps de seringue à la colonne d'affinité, le plaçant sur un rack de commande pneumatique pour la fixation;

- - - - après avoir vidé le liquide à l'intérieur de la colonne d'affinité, prélever l'échantillon de liquide supérieur de l'étape 8 et l'injecter dans la cartouche de seringue;

- - - - faire sortir le liquide à une vitesse de 1 ~ 2 gouttes / seconde;

9.2 lavage

- - - - à égoutter le liquide;

- - - - laver la colonne d'immunoaffinité successivement avec 10 ml de tampon lpbst (voir 7.3), 10 ml d'eau, débit 2 ~ 3 gouttes / seconde;

9.3 élution

- - - - après le drainage du liquide à égoutter, retirer la cartouche d'aiguille, souffler le liquide dans le parent sec et la colonne, éluer avec 1,5 ml de méthanol, recueillir l'éluant dans une bouteille d'échantillon de 2 ml, diluer à l'échelle avec de l'eau, mélanger;

- - - - après filtration avec un filtre microporeux de 0,22 μm, transférer dans un flacon d'échantillon pour analyse HPLC.

* Égoutter le dernier liquide avant chaque échantillon.

10、Interprétation des résultats:

Teneur en Ochratoxine a = concentration détectée × multiple de dilution

11,Conditions de stockage et date d'expirationPour:

Condition de stockage: 2 ~ 8 ℃.

Date d'expiration: le produit est valable 18 mois.