Utiliser des objets

BisphénolsLa colonne d'affinité a est capable de purifier spécifiquement le bisphénol A et le bisphénol s dans l'échantillon, elle utilise comme support de phase solide un gel d'agarose en forme de colonne couplé à des anticorps au Bisphénol a pour former un immunosorbant, et la colonne de montage est transformée en colonne d'immunoaffinité. Il est capable de purifier spécifiquement le bisphénol A dans les échantillons. La colonne d'affinité bisphénol A est largement utilisée dans l'extraction d'échantillons tels que les aliments et les boissons, la méthode est rapide, simple à utiliser et de haute précision, joue un rôle très important dans l'amélioration de la qualité et de la sécurité des aliments.

Cette description méthode applique la méthode de colonne d'affinité pour détecter les bisphénols dans les alimentsMéthode de détection de A.

GB 5009.305-2025 détermination du bisphénol A, du bisphénol F et du bisphénol s dans les aliments normalisés nationaux pour la sécurité alimentaire

Conditions de stockage

Cette colonne d'affinité est conservée enÀ 2 - 8 ° C, il ne doit jamais être congelé et a une durée de conservation de 18 mois. Il est recommandé de l'utiliser à température ambiante (18 - 30 ° c).

Préparation de la solution expérimentale

lMéthanol- solution aqueuse (80 + 20):Quantité de méthanol80mL, Ajouter 20 ml d'eau et bien mélanger.

lMéthanol- solution aqueuse (40 + 60):Quantité de méthanol40mL, Ajouter 60 ML d'eau et bien mélanger.

l盐酸溶液(10+90):Quantité prendre10 ml d'acide chlorhydrique concentré, ajouter 90 ml d'eau et mélanger.

lSolution PBS:SeraLe kit de réactif tampon PBS (réf. Produit: g3001) est dissous dans 1000 ml d'eau pure et mélangé.

Étapes d'analyse

Méthode GB 5009.305-2025

1.0 extraction des échantillons

1.1 viande et produits carnés, produits aquatiques, produits laitiers solides et semi - solides (poudre de lait, lait fermenté, etc.), préparations pour nourrissons et enfants en bas âge

Appeler prendreUn échantillon de 1 G (exactement à 0,01 g), placé dans un tube à centrifuger en polypropylène de 50 ml, additionné de 50 µl de liquide de mélange isotopique interne, est laissé 30 min après mélange sous agitation. Ajouter 2 ml d'eau, agiter au Vortex pendant 30 s et ajouter 5 ml d'acétonitrile pour mélanger au vortex. Le mélange est extrait par ultrasons pendant 15 min et centrifugé à 10 000 tr / min à 4°C pendant 10 min. Le surnageant est pris et placé dans un tube de soufflage d'azote en verre, soufflé lentement à 40 ° C avec de l'azote jusqu'à environ 2 ml, mélangé avec 8 ml de PBS ajouté, à purifier.

1.2 Œufs, lait et produits laitiers liquides

Appeler prendreUn échantillon de 1 G (exactement à 0,01 g) est placé dans un tube à centrifuger en polypropylène de 50 ml, on ajoute 50 µl de liquide de mélange isotopique interne et on laisse 30 min après mélange sous agitation. On ajoute 5 ml d'acétonitrile, extrait aux ultrasons 15 min après mélange au vortex et centrifuge 10 min à 10 000 tr / min à 4°C. Le surnageant est pris et placé dans un tube de soufflage d'azote en verre, soufflé lentement à 40 ° C avec de l'azote jusqu'à environ 2 ml, mélangé avec 8 ml de PBS ajouté, à purifier.

1.3 céréales et aliments auxiliaires à base de céréales pour nourrissons et enfants en bas âge

Appeler prendreUn échantillon de 1 G (exactement à 0,01 g), placé dans un tube à centrifuger en polypropylène de 50 ml, additionné de 50 µl de liquide de mélange isotopique interne, est laissé 30 min après mélange sous agitation. On ajoute 10 ml d'une solution méthanolique - aqueuse (80 + 20), agite au Vortex pendant 30 s, extrait aux ultrasons pendant 15 min et centrifuge à 10 000 tr / min à 4°C pendant 10 min. Le surnageant est pris et placé dans un tube de soufflage d'azote en verre, soufflé lentement à 40 ° C avec de l'azote jusqu'à environ 2 ml, mélangé avec 8 ml de PBS ajouté, à purifier.

1.4 légumes, fruits

Appeler prendre1 g d'éprouvette (exactement à 0,01 g), placée dans un tube à centrifuger en polypropylène de 50 ml, mélangée avec 100 µl de solution d'acide chlorhydrique (10 + 90), puis 50 µl d'homotopieLiquide de mélange pour étalons intra - végétaux, laisser reposer 30 min après mélange oscillant. On ajoute 5 ml d'acétonitrile, agite au Vortex pendant 30 s, extrait aux ultrasons pendant 15 min et centrifuge à 4°C pendant 10 min à 10 000 tr / min. Le surnageant est pris et placé dans un tube de soufflage d'azote en verre, soufflé lentement à 40 ° C avec de l'azote jusqu'à environ 2 ml, mélangé avec 8 ml de PBS ajouté, à purifier.

1.5 boissons

Appeler prendreUn échantillon de 1 G (exactement à 0,01 g) est placé dans un tube à centrifuger en polypropylène de 2 ml, 50 µl de liquide de mélange isotopique interne sont ajoutés et laissés 30 min après mélange sous agitation. 10 000 tr / min centrifuger pendant 10 min. Prélever le surnageant dans un tube de centrifugation en polypropylène de 50 ML et mélanger avec une solution de 10 ml de PBS à purifier.

Note: l'échantillon clarifié (par exemple, eau purifiée, eau minérale, etc.) peut être non centrifugé, directement ajouté au PBS pour le mélange.

2.0 purification des échantillons

2.1 activation de la colonne d'affinité

Fixation de la colonne d'immunoaffinité àSous une seringue de 10,0 ML. La pression de régulation est telle que la solution de protection de la colonne traverse lentement la colonne d'immunoaffinité avec un débit d'environ 2 ml / MIN (1 goutte / s) jusqu'à ce qu'une petite quantité d'air traverse le corps de colonne. Une quantité précise de 5 ml d'activateur de colonne d'affinité (produit de colonne d'affinité standard) est prise pour laver la colonne d'affinité avec un débit de 1 goutte / seconde jusqu'à ce qu'une petite quantité d'air traverse le corps de colonne. Laver la colonne 1 fois avec 5,0 ml d'eau pure, jeter tout l'effluent, laver la colonne avec 10,0 ml de solution de PBS pH 7,4 à un débit de 1 goutte / seconde, pour les 2 - 3 derniers ml de solution pour remplir la colonne, arrêter la pression, boucher la sortie de liquide inférieure avec un bouchon, prêt à l'emploi.

Note: pour améliorer encore le bisphénolA effet purifiant et adsorbant de la colonne d'immunoaffinité qui nécessite un traitement d'activation avant utilisation. S'il vous plaît utiliser la colonne d'affinité Après activation dans 1 heure.

2.2 purification de la colonne d'affinité

取Le liquide à purifier de l'étape 1.0 passe tout au - dessus de la colonne avec un débit de 1 goutte / seconde, élimine tout l'effluent et lave la colonne d'immunoaffinité avec 10 ml d'eau avec un débit de 1 à 2 gouttes / seconde, une fois que les gouttes d'eau à purifier sont terminées, la colonne d'immunoaffinité est évacuée à l'aide d'une pompe à vide. On ajoute 1 ml de méthanol pour éluer avec un débit de 1 - 2 gouttes / seconde, on recueille l'éluant dans un tube de soufflage d'azote en verre et on sèche lentement à 40°C sous azote. Ajouter exactement 0,40 ml de méthanol, mélanger au Vortex pendant 10 s, ajouter exactement 0,60 ml d'eau, mélanger au Vortex après transfert dans un tube de centrifugation en polypropylène de 2 ml, centrifuger 5 min à 10 000 tr / min, prendre le surnageant pour la chromatographie en phase liquide - Dosage par spectromètre de masse en série.

Précautions

1)Ne modifiez pas les étapes de l'opération dans le manuel d'instructions, si vous avez besoin de modifications, veuillez contacter le Département technique de notre société pour confirmer si les modifications sont raisonnables.

2)L'étape de fonctionnement, l'échantillon sur la colonne, le lavage, l'élution, assurez - vous de contrôler le bon débit, ne peut pas être trop rapide, sinon le résultat de la détection sera faible.

3) Cette expérience minimise l'utilisation de contenants de produits en plastique, en particulierMatériel PC fournitures en plastique, l'eau expérimentale est distillée en utilisant autant que possible la verrerie placée.

Liste des configurations de colonnes d'affinité

Matériel et réactifs à préparer