Synthétiseur ADN / ARNLa méthode d'utilisation (par exemple, l'ADN) couvre de nombreux aspects tels que la préparation des réactifs, l'entrée de séquence, la configuration des paramètres, l'inspection de la colonne de synthèse, le nettoyage des lignes, la surveillance du processus de synthèse et le traitement des produits.

Préparation des réactifs:

Vérifiez soigneusement la quantité de réactif dans tous les flacons de réactif sur le synthétiseur et remplacez - les si nécessaire, en accordant une attention particulière aux solvants tels que l'acétonitrile en plus grandes quantités.

Assurez - vous que le Groupe de flacon de réactif et le Groupe de flacon de base sont bien scellés et maintiennent une certaine pression pour empêcher l'entrée d'air extérieur d'affecter l'effet de synthèse.

Entrée de séquence:

L'entrée de la séquence d'ADN à synthétiser dans le synthétiseur, qui peut être effectuée par un logiciel de conception assistée par ordinateur, prend en compte des facteurs tels que la préférence des codons, la structure secondaire et la restriction des sites enzymatiques.

Vérifiez que les étapes de composition sélectionnées sont correctes et assurez - vous que le processus de composition se déroule conformément au processus prédéfini.

Paramètres:

La méthode de fin est choisie, l'état d'origine de l'instrument est généralement trityloffauto, si l'on veut lier l'oligonucléotide purifié avec un groupement 5 '- DMT, on le transforme en état de fin tritylonauto.

Sous username dans chaque moniteur de colonne, entrez le nom de sauvegarde souhaité pour faciliter la gestion et le suivi ultérieurs.

Chaque flacon de collection est étiqueté avec un code à la place de la séquence d'ADN correspondante, ce qui facilite l'identification et la classification.

Inspection de la colonne synthétique:

Exécutez l'étape startcolumn pour vérifier la position de chaque colonne, assurez - vous que la colonne de synthèse est dans la bonne position sur le synthétiseur et évitez l'échec de la synthèse en raison d'un écart de position.

Vérifiez que le résidu de solvant (bouteille de liquide usé) connecté au synthétiseur est plein, empêchant le déversement de liquide dû à une bouteille de liquide usé trop pleine, affectant l'environnement de synthèse.

Nettoyage des lignes:

Si le collecteur divisionnaire est utilisé pour recueillir les effluents de chaque étape de déprotection du DMT, assurez - vous que les tubes sont bien nettoyés et propres et ouvrez le collecteur divisionnaire pour vous assurer que la ligne de déchets de DMT mène au collecteur divisionnaire.

Démarrez le cycle, exécutez le programme de démarrage pour nettoyer la ligne de réactif, éliminer le réactif d'origine et empêcher l'ancien réactif d'interférer avec la nouvelle réaction de synthèse.

Surveillance du processus de synthèse:

Au cours de la synthèse, le déroulement de la réaction de synthèse peut être surveillé par la détermination de la conductivité électrique totale des cations DMT libérés au cours de chaque cycle de synthèse d'ADN à l'aide de cellules de flux conductrices.

Vérifiez régulièrement l'état de fonctionnement du synthétiseur et assurez - vous que les différents paramètres (tels que la température, la pression, le temps, etc.) sont dans la plage normale.

　　Synthétiseur ADN / ARNSynthèse terminée avec traitement du produit:

Une fois la synthèse terminée, le vecteur est retiré pour clivage et déprotégé, il faut généralement au moins 2 heures pour les fragments d'ADN à 40 pb près et plus la chaîne est longue.

L'élimination des fragments courts et des ions sels par des méthodes de purification appropriées (p. ex., Purification OPC, Purification page, Purification dessalée, Purification HPLC, etc.) améliore la pureté du produit.

Vérification du séquençage de l'ADN purifié, en s'assurant que sa séquence correspond à celle attendue.