Première étape:Synthétiseur de PolypeptidesPréparation pré - opérationnelle – jeter les bases du succès

Inspection de l'environnement et de l'équipement

Choisissez un endroit sec, propre et stable en température (20 ℃ ± 5 ℃) pour éviter les interférences de l'humidité, de la chaleur ou de la poussière.

Assurez - vous que l'instrument est bien installé et que la tension d'alimentation et la fréquence correspondent aux exigences de l'équipement (par exemple, le compteur de pression d'air comprimé "air" nécessite 60 - 100psi, le compteur "n₂" nécessite 5 - 10psi).

Vérifiez que les bouteilles de réservoir de solvant, les raccords de tuyauterie de gaz sont serrés pour éviter les fuites.

Préparation des matériaux et des réactifs

Préparez des acides aminés de haute pureté, des réactifs d'activation tels que l'hbtu, des solvants (DMF, DCM) et des résines pour garantir l'absence d'impuretés.

Les réactifs sont pesés selon le Protocole de synthèse, mélangés strictement en proportion (par exemple 3 fois l'excès d'acides aminés pour la réaction de couplage).

La résine est ajoutée au réacteur, essorée après gonflage au DCM et lavée au DMF pour éliminer les impuretés.

Réglage des paramètres et Calibration

Entrez la séquence polypeptidique, réglez les conditions réactionnelles (température, temps, proportion de solvant).

Exemple: déprotection fmoc (20% Pipéridine / DMF, 5 min x 2 fois); Réaction de couplage (3 fois excès d'acides aminés, 1 heure).

Exécutez le Programme d'auto - test de l'équipement, calibrez les paramètres tels que la température, la pression, l'aiguille de prélèvement de liquide et assurez - vous de la précision du capteur.

Étape 2: opération de processus de synthèse – analyse des étapes principales

Lancer le programme de synthèse

Allumez l'alimentation du synthétiseur et l'interrupteur d'air comprimé pour lancer le programme prédéfini.

L'instrument complète automatiquement les cycles de déprotection (par exemple, élimination des groupes FMOC), de couplage (réticulation des acides aminés), de lavage et surveille la température, la pression et le pH de la réaction.

Principaux points opérationnels

Déprotection: utilisez un solvant alcalin (par exemple Pipéridine 20% / DMF) pour éliminer les groupes aminoprotecteurs et répétez 2 fois pour vous assurer qu'ils sont complets.

Réaction de couplage: la solution d'acide aminé activée est injectée dans la Chambre réactionnelle, additionnée de DMF à la concentration appropriée et agitée pendant 1 heure pour former la liaison peptidique.

Lavage: lavage au DMF après chaque étape de réaction, élimination des substances et des sous - produits n'ayant pas réagi, réduction de l'accumulation d'impuretés.

Surveillance et réglage en temps réel

L'évolution de la réaction est suivie par Absorbance UV ou par spectrométrie de masse pour s'assurer que chaque étape se déroule comme prévu.

Si le liquide réactionnel s'avère hétérogène, ajuster la vitesse de rotation de l'agitateur; Si la température est anormale, vérifiez la position du disque chauffant.

Étape 3: post - traitement synthétique et maintenance – garantir la stabilité à long terme

Collecte et purification des produits

Le polypeptide est craqué de la résine par addition du lysat (par example TFA / eau / triisopropylsilane = 95: 2,5: 2,5) et agitation à température ambiante pendant 2 heures.

La résine est éliminée par filtration, le Peptide brut est précipité à l'éther après concentration du lysat et le produit solide est obtenu par centrifugation, lavage.

La purification par chromatographie liquide haute performance (HPLC) élimine les impuretés et permet d'obtenir des Polypeptides de haute pureté (> 95%).

　　Synthétiseur de PolypeptidesNettoyage et entretien des équipements

Nettoyage instantané: immédiatement après la fin de la synthèse, lavez le réacteur, l'aiguille, la tête de pompe et la ligne avec de l'éthanol ou de l'eau désionisée, évitant ainsi la corrosion de l'équipement par des réactifs résiduels.

Entretien régulier: remplacement mensuel des pièces usées (par exemple, bagues d'étanchéité, aiguilles), étalonnage de la précision du capteur; Lubrifiez la partie mécanique chaque trimestre pour un fonctionnement fluide.

Stockage à long terme: si l'appareil est inactif, après le lavage et le nettoyage, retirez le stockage dans un endroit sec et ventilé pour éviter la rouille ou l'humidité.

Vérification et enregistrement des défaillances

FAQ: fuite de liquide dans la tête de pompe (remplacement de la bague d'étanchéité), température trop élevée du réacteur (réglage de la position du disque chauffant), l'appareil ne peut pas être allumé (vérification de l'alimentation et de la carte de commande).

Enregistrement et rapport: enregistrement détaillé des paramètres opérationnels de chaque étape (dosage des réactifs, temps de réaction, température) et de la pureté du produit, générant des rapports expérimentaux qui serviront de base à l'optimisation ultérieure.