Un,Diffuseur de lumière laser multi - angle WyattPréparation avant le test

Préparation des solvants

Système en phase aqueuse: à l'aide d'eau Ultrapure ou d'une solution de sel formulé (environ 1 L), on ajoute un bactériostatique nan₃ à 0,02% et on filtre sur membrane filtrante de 0,22 µm.

Système de phase organique: avec un solvant de qualité HPLC, également filtré avec une membrane filtrante de 0,22 µm (les réactifs importés sont traités selon les conditions réelles).

Préparation des échantillons

Les concentrations sont formulées selon la gamme de poids moléculaire (anneau quantitatif 100 µl):

Poids moléculaire ~ 1000kda: 0,5 - 1mg / ml

Poids moléculaire ~ 100kda: 1 - 2mg / ml

Poids moléculaire ~ 10kda: 3 - 5mg / ml

Poids moléculaire ~ 5kda: 5 - 10mg / ml

Les échantillons doivent être filtrés avec une membrane filtrante de 0,22 µm ou 0,45 µm, ou les impuretés éliminées par centrifugation, en utilisant autant que possible une formulation en phase mobile.

Inspection des instruments

Vérifiez que la connexion du cordon d'alimentation, l'interrupteur d'alimentation et le commutateur (pour la connexion du signal du cordon d'alimentation) sont activés.

II. Démarrage et équilibrage des instruments

Ordre de démarrage

Allumez successivement la pompe, le thermostat de la colonne (température de consigne), le système d'échantillonnage (échantillonneur manuel / automatique), le détecteur différentiel ou UV, le détecteur de viscosité, l'alimentation du détecteur de diffusion de lumière laser multi - angle et l'ordinateur.

Système rinçage et équilibrage

Allumez la pompe et rincez le système avec de l'eau Ultrapure pendant environ 5 minutes (pompe de purge), fermez la vanne de purge.

Utilisez le système de rinçage en phase mobile récemment formulé (le système organique utilise directement la phase mobile).

Ajustez le débit à 0,1 ml / MIN (si vous accédez au détecteur de viscosité, attendez qu'il entre dans l'interface de travail avant d'allumer la pompe et que l'IP et le DP soient purgés).

Si la colonne GPC / sec n'est pas accessible dans le système, le débit peut être ajusté directement à 0,1 - 1,0 ml / MIN (sans détecteur de viscosité, la vanne de purge du détecteur différentiel doit être à l'état "purge on").

Si le système a accédé à la colonne GPC / sec, le débit de départ doit être de 0,1 ml / min, toutes les 1 à 2 minutes, augmenter le débit de 0,1 ML, ajuster le débit à 0,4 - 0,5 ml / min, équilibrer complètement le système.

Temps d'équilibre: le système de phase aqueuse recommande de rincer et d'équilibrer un jour à l'avance et de commencer l'essai le lendemain; Le temps d'équilibre du système de phase organique est généralement de 3 à 12 heures.

Iii. Opérations d'essai et acquisition de données

Équilibre du système et stabilité de base

Une fois le système à équilibrer suffisamment, ajuster progressivement le débit au débit d'essai.

La vanne de purge du détecteur différentiel est réglée à l'état "purge off" et le signal à stabiliser est remis à zéro (Zero).

Pour le mode opératoire du viscosimètre (visco Star), voir l'annexe, à stabiliser à la ligne de base.

Appeler le modèle d'essai

Appelez le modèle d'essai correspondant dans le logiciel Astra (template / Method créé par l'Ingénieur d'installation est recommandé).

Échantillons à aiguille unique: File → New → Experiment from template / Method → my template / method, sélectionnez le modèle d'essai approprié.

échantillonneur automatique: File → New → Sample set template / blank Sequence → my template / method, sélectionnez le modèle d'essai approprié.

échantillonnage et acquisition de données

Passer la vanne d'admission de "load" à l'état "Inject" pour prélever l'échantillon à travers le système d'admission.

Le logiciel Astra démarre automatiquement l'acquisition des données et, une fois l'acquisition des données terminée, le logiciel s'arrête en fonction de l'heure définie, ou manuellement (Experiment → STOP).

Conservation des données

Une fois l'acquisition des données terminée, appuyez sur fichier → enregistrer en tant que..., nommez le fichier et enregistrez - le.

Quatre,Diffuseur de lumière laser multi - angle WyattTraitement des données et reporting View

Processus de traitement des données

Ajustement de la ligne de base: Double - cliquez sur Baseline, cochez LS 11 (angle 90°), Ajustez le point de terminaison de la ligne de base, garantissez le niveau de base, appuyez sur OK / apply pour enregistrer.

Définition du pic: Déplacez la souris jusqu'au point de départ du pic, maintenez le bouton gauche enfoncé pour faire glisser jusqu'au point de chute du pic, relâchez le bouton gauche pour définir la zone du pic, micro - régler le bord de la zone du pic, appuyez sur OK / apply pour enregistrer.

Entrée et normalisation de la valeur DN / DC: Entrez la valeur DN / DC et sélectionnez normalise (il n'est pas nécessaire de répéter l'opération si le modèle a été normalisé sous ce système avec des échantillons Standard < 50 kDa tels que BSA, dextran).

Afficher le rapport: une fois que vous avez terminé les étapes ci - dessus, affichez le rapport pour obtenir les résultats du test.

Correction de l'instrument (effectuée régulièrement)

Correction du volume retardé: corrige le volume de chaque ligne inter - détecteur pour assurer l'alignement des pointes, généralement effectué par l'Ingénieur d'installation, et les résultats sont sauvegardés dans le modèle de logiciel Astra.

Correction du signal angulaire à 90° (correction au toluène): obtient le coefficient de correction de la valeur de l'intensité lumineuse diffusée angulaire à 90° par rapport à la valeur de la tension, recommandé annuellement ou semestriellement.

Correction normalisée à dix - huit angles: 17 autres détecteurs sont étalonnés avec un angle de référence de 90°, corrigé avec un étalon de RG < 10 nm tel que Dextran Dextran à 30 kDa ou BSA pour la sérum albumine bovine.