Grâce à l'imagerie optique combinée à l'analyse logicielle, le système d'imagerie par gel permet une analyse quantitative et de concentration précise du poids moléculaire, avec les principaux processus et points techniques suivants:
I. principe et étapes de quantification précise du poids moléculaire
Construction de courbes standard
Le système utilise des bandes de dnamarker de poids moléculaire connu comme référence pour marquer leur position et générer des courbes ajustées de la distance poids moléculaire - migration par logiciel. Cette courbe est basée sur la relation linéaire du poids moléculaire à la mobilité en électrophorèse, assurant la précision du calcul du poids moléculaire de la bande inconnue. Par exemple, une fois que le poids moléculaire d'une bande de Marker sur un film d'ADN (par exemple 100 pb, 500 pb, 1000 Pb) a été marqué, le système ajuste automatiquement la courbe pour l'extrapolation ultérieure du poids moléculaire d'une bande inconnue.
Calcul du poids moléculaire de la bande inconnue
Le gel après électrophorèse de l'échantillon à mesurer est placé dans un système d'imagerie, la fluorescence est excitée par une source de lumière ultraviolette ou visible (par exemple, la coloration EB), et après capture de l'image par le logiciel, son poids moléculaire est calculé en combinaison avec une courbe standard en fonction de la position de migration de la bande inconnue dans le gel. Cette méthode est plus précise que l'estimation à l'œil nu et l'erreur peut être contrôlée à ± 5%.
II. Méthode de quantification précise de la concentration
Calibration et contraste de densité
Le système étalonne d'abord une bande standard à une concentration connue (par exemple, la teneur en ADN d'une bande sur un film d'ADN), puis calcule la concentration inconnue de l'échantillon en cliquant sur la bande inconnue via le logiciel pour comparer sa différence de densité par rapport à la bande standard. Par exemple, si la densité de bande standard est de 100 unités, la concentration correspondante est de 50 ng / µl et la densité de bande inconnue est de 50 unités, sa concentration est d'environ 25 ng / µl.
Relation linéaire de densité optique
La quantité de lumière absorbée par un échantillon est linéairement liée à la concentration ou à la qualité. Le système extrapole la concentration inconnue de l'échantillon en mesurant la densité optique de la bande (valeur de niveau de gris ou intensité de fluorescence), combinée à une courbe standard ou à des données d'échantillon connues. Cette méthode s'applique à la détermination de la concentration des gels d'ADN, d'ARN et de protéines tels que les gels page.
Iii. Principales garanties techniques
Optimisation du système optique
L'utilisation d'une source de lumière transmise par ultraviolet ou d'une source de lumière transmise par lumière blanche assure une distribution uniforme de la lumière et réduit l'impact de la densité optique inégale sur les résultats. Un CCD haute résolution ou un appareil photo numérique capture des images et améliore la qualité de l'image en combinaison avec la conception de la boîte obscure pour masquer les interférences de sources lumineuses externes.
Fonctions d'analyse logicielle
Le logiciel prend en charge les opérations telles que la déduction de fond, la segmentation de la bande, le balayage de densité, etc., qui peuvent générer des courbes de balayage longitudinal et les intégrer pour une quantification précise. Par exemple, dans la quantification par PCR, le logiciel peut calculer le pourcentage relatif de chaque bande par rapport à la bande totale, et le balayage de densité génère une courbe de distribution longitudinale des valeurs de niveaux de gris de la bande.
Iv. Scénarios d'application et avantages
Recherche en biologie moléculaire: détermination précise du poids moléculaire et de la concentration de l'ADN / ARN, clonage de gènes auxiliaires, vérification du séquençage.
Ingénierie des protéines: analyse quantitative de la proportion de produits d'expression des protéines, optimisation du processus de fermentation.
Développement de médicaments: la pureté des médicaments est évaluée par la détermination de la concentration et le contrôle de la qualité est assuré.
Le système permet une double quantification précise du poids moléculaire et de la concentration grâce à des processus normalisés et à des technologies de pointe, fournissant un support de données fiable pour la recherche en sciences de la vie.