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Jiangsu Green Alliance Scientific Instrument Co., Ltd
Maîtriser la méthode d'utilisation correcte du tube de centrifugation d'ultrafiltration est la clé pour garantir le succès de l'expérience
Date :2025-12-01Lire :1
Le tube de centrifugation d'ultrafiltration est un consommable de laboratoire qui intègre la technologie de séparation de centrifugation et de membrane et est largement utilisé dans des opérations biochimiques telles que la concentration de protéines, le dessalement, le remplacement de tampon, la purification d'acide nucléique et l'élimination de petites molécules. Son noyau est construit dans une membrane d'ultrafiltration de poids moléculaire spécifique piégée qui entraîne l'échantillon à travers les pores de la membrane par la force centrifuge, permettant une séparation efficace de la molécule cible. Cependant, s'il n'est pas utilisé correctement, il est susceptible de provoquer un blocage de la membrane, une perte d'échantillon, un faible taux de récupération et même une rupture du corps du tube. La maîtrise de son utilisation correcte est la clé pour garantir le succès de l'expérience.
I. préparation avant utilisation
Sélection précise des membranes par poids moléculaire: la macromolécule cible doit être supérieure à 2 - 3 fois le mwco et les impuretés de petites molécules inférieures à 1 / 2 mwco, assurant une rétention et une transmission efficaces;
Mouiller la surface de la membrane (si nécessaire): sur la membrane hydrophobe (par exemple, PVDF), d'abord ajouter une petite quantité de tampon ou d'éthanol pour mouiller pendant 5 minutes, puis centrifuger pour éliminer, éviter la résistance à l'air affecte le débit;
Vérifiez l'intégrité du corps du tube: vérifiez que la membrane filtrante n'est pas cassée, que la bague d'étanchéité du couvercle du tube est en bon état et évite les fuites centrifuges.
II. Spécifications de chargement des échantillons
Contrôle du volume de l'échantillon supérieur: généralement pas plus de 75% de la capacité maximale du tube de centrifugation (par exemple, tube de 15 ml plus échantillon ≤ 11 ML), en réservant un espace de concentration;
Traitement de pré - clarification: les échantillons contenant des particules ou des fragments de cellules doivent être préalablement centrifugés à faible vitesse (par exemple 3000 × G, 5 min) ou filtrés pour éviter le colmatage des pores de la membrane;
Évitez les viscosités élevées ou les concentrations élevées directement sur l'échantillon: il peut être correctement dilué pour augmenter le flux initial.
Iii. Paramètres centrifuges
Référence à la vitesse de rotation recommandée par le fabricant: généralement 3000 - 5000 × G, il est strictement interdit de dépasser la vitesse (voir la valeur maximale RCF indiquée sur la paroi du tube);
Régler le temps approprié: centrifuger par étapes (par exemple 10 - 15 minutes à chaque fois), observer le volume de concentré et éviter les films secs;
Fonctionnement à basse température: pour les protéines sensibles à la chaleur, utilisez une centrifugeuse congelée à 4 ℃, évitez la dénaturation.
Iv. Techniques de concentration et de lavage
Remplacement du tampon: lorsqu'il est concentré à environ 100 - 200 μl, ajouter un volume égal de nouveau tampon, mélanger et centrifuger à nouveau, répéter 2 - 3 fois peut éliminer > 95% des impuretés de petites molécules;
Éviter l'assèchement de la membrane: le point final de concentration retient au moins 50 µl de liquide et la membrane sèche réduira irréversiblement le taux de récupération;
Mélanger doucement: souffler lentement avec une pipette, ne pas gâcher violemment les macromolécules.
V. recyclage et nettoyage (si réutilisable)
La plupart des tubes centrifuges d'ultrafiltration sont de conception jetable, mais certains modèles peuvent être réutilisés;
Rincer immédiatement après l'utilisation avec de l'eau désionisée et tremper avec 0,1 mnaoh ou une solution de nettoyage spéciale pour éliminer les résidus;
L'autoclavage ou le séchage est strictement interdit afin de ne pas déformer la structure du film.