Le synthétiseur d'amorces est l'équipement de base du laboratoire de biologie moléculaire et son fonctionnement efficace et stable est essentiel pour les expériences. Les trois types de défaillance les plus courants sont les lignes bloquées, les fuites de vannes et les anomalies de données synthétiques. Cet article analysera brièvement cela et fournira des solutions ciblées.
I. blocage des lignes
C'est un dysfonctionnement général qui conduit directement à l'échec de la synthèse.
Diagnostic: il s'accompagne généralement d'une augmentation anormale de la pression de la colonne, d'une mauvaise livraison des réactifs, d'un rendement final extrêmement faible ou d'un manque de produit.
Principales causes et solutions:
Colmatage des colonnes synthétiques: survient le plus souvent. Causé par la précipitation de monomères ou de solutions de base, l'assèchement du lit de colonne ou de particules solides. Solution: interrompre immédiatement la synthèse et rincer la colonne de synthèse et la ligne amont en sens inverse ou avant avec un solvant puissant de déblocage (par exemple acétonitrile, solution concentrée de TCA / dichlorométhane). Chaque jour, il est nécessaire de s'assurer que les réactifs sont frais, sans eau et bien rincés après la synthèse.
Micro - blocage de la ligne ou de la vanne: pression élevée dans la ligne de réactif spécifique. Causée par des cristallisations ou des dégradats. Solution: effectuez la procédure de nettoyage « purge » pour un réactif spécifique ou démontez manuellement les blocs de vannes et les lignes capillaires associés au nettoyage.
II. Fuite de valve et de ligne
Les fuites entraînent un dosage inadéquat des réactifs, une contamination croisée et même des dommages à l'équipement.
Diagnostic: la pression n'a pas pu s'établir ou a continué à baisser, il y a une accumulation de liquide autour de la colonne réactionnelle, le rendement de synthèse est faible et il y a une "absence" ou une mauvaise incorporation dans la séquence.
Principales causes et solutions:
Vieillissement ou usure des joints d'étanchéité: les joints d'étanchéité du rotor ou les joints d'étanchéité des raccords de tuyauterie des vannes (en particulier les vannes de distribution principales) sont les points de fuite les plus courants. Solution: remplacez régulièrement et de manière préventive tous les joints d'étanchéité critiques conformément au plan de maintenance. Immédiatement après la découverte de la fuite, arrêtez - vous et Remplacez les pièces d'étanchéité correspondantes en vous référant au manuel.
Connexions de ligne desserrées ou fissurées: vérifiez que chaque connecteur de manchon est serré pour voir si les capillaires en téflon ont des plis ou des fissures. Solution: Rebranchez ou remplacez la ligne endommagée.
Iii. Anomalies des données synthétiques
Se manifeste par un faible rendement, une mauvaise pureté (en particulier l'échec des amorces à longue chaîne), mais pas d'alarme pour l'instrument.
Diagnostic: l'analyse par HPLC / spectrométrie de masse a révélé des produits incorrects, des séquences tronquées multiples ou des rendements en longueur totale bien inférieurs aux attentes.
Principales causes et solutions:
Problèmes avec les réactifs (les plus fréquents): dégradation des solutions de monomères (en particulier les monomères g), défaillance des activateurs ou des oxydants, teneur excessive en acétonitrile. Solution: gestion rigoureuse des réactifs, utilisation de réactifs frais, de haute pureté, anhydres et acétonitrile, changement régulier du dessicant.
Faible efficacité de décapage / déprotection: concentration insuffisante de liquide de décapage ou de réactif final de coupe / déprotection (par exemple, ammoniaque concentrée) ou mauvais réglage du temps. Solution: Assurez - vous que les réactifs sont formulés avec précision et vérifiez que la procédure de réaction de déprotection est adéquate.
Erreurs logicielles ou paramétriques: Bien que rares, des séquences synthétiques incorrectes ou des paramètres cycliques peuvent entraîner des échecs systématiques. Solution: vérifiez soigneusement le fichier de séquence et les paramètres de composition avant chaque composition.
Résumé: Mieux vaut prévenir que guérir. L'établissement d'un programme régulier d'entretien préventif (p. ex., lavage mensuel, remplacement trimestriel des joints d'étanchéité, suivi de la date d'expiration des réactifs) et la tenue d'un journal de travail détaillé constituent une stratégie efficace pour minimiser les défaillances et garantir le succès et la qualité de la synthèse des amorces. Lorsque vous rencontrez des problèmes complexes, vous devez contacter l'Ingénieur de l'équipement en temps opportun.