I. spécifications de fonctionnement quotidien
Préparation et inspection des réactifs
Assurez - vous que les flacons de réactifs (par exemple, acétonitrile, activateur, oxydant) sont bien scellés pour maintenir la pression d'argon stable et empêcher l'entrée d'air extérieur d'affecter l'effet de synthèse.
Vérifiez la marge de réactif avant la synthèse, Remplacez les bouteilles vides à temps et évitez l'interruption de la synthèse due à un réactif insuffisant.
Entrée de séquence et paramètres
Entrez la séquence d'ADN cible via un logiciel de conception assistée par ordinateur, en tenant compte de la préférence du codon, de la structure secondaire et des sites enzymatiques de restriction.
Vérifiez que les étapes de synthèse (p. ex. déprotection, couplage, fermeture, oxydation) sont correctes, choisissez la méthode de fin (p. ex. tritylonauto retient le groupe 5 '- DMT pour une purification ultérieure).
Surveillance du processus de synthèse
Exécutez l'étape startcolumn avant de démarrer pour vérifier que la position de la colonne de composition est correcte.
La quantité de cations DMT libérés est surveillée dans la synthèse à l'aide d'une cellule de flux conductrice pour juger de l'avancement de la réaction.
Vérifiez régulièrement que les paramètres tels que la température, la pression, etc. sont dans la plage normale.
Traitement des produits
Une fois la synthèse terminée, le produit est coupé du support en phase solide et les fragments courts et les ions sels sont éliminés par purification OPC, page ou HPLC.
Après purification, le produit est conservé par fractionnement, en évitant la congélation et la dégel répétées.
II. Points clés de l'entretien quotidien
Bouchon de bouteille "o" anneau
Vérifiez tous les mois et remplacez - les au moins une fois par an. En cas de précipité blanc, laver avec un coton - tige en acétonitrile.
Retirez l'ancien anneau avec une pince hémostatique lors du remplacement, assurez - vous que le bouchon est exempt de particules et installez le nouvel anneau et effectuez un test de pression.
Bouteilles de réservoir et lignes
Gardez le flacon de réservoir propre et vérifiez régulièrement la pression d'argon et l'étanchéité de la ligne.
Nettoyez les lignes avec un nouveau réactif avant la synthèse pour éviter que les résidus de réactifs plus anciens n'interfèrent avec la réaction.
Valve d'étranglement de voie d'écoulement
Nettoyez une fois par mois, d'abord bouillir dans l'eau pendant 15 minutes, puis nettoyez par ultrasons au méthanol pour éviter les blocages.
Nettoyage des instruments et protection contre la poussière
Essuyez le boîtier avec un chiffon humide chaque semaine pour éviter d'ouvrir les bouches d'air; Après des expériences de haute sensibilité, le bac de réaction est irradié avec une lampe UV pendant 15 minutes pour être stérilisé.
Lorsque vous ne l'utilisez pas à long terme, allumez - le 1 - 2 fois par semaine pendant environ une demi - heure à chaque fois pour éviter l'humidité des composants.
Iii. Inspection des défaillances courantes
Faible rendement de synthèse
Causes: défaillance du réactif, fuite de la ligne, déviation de la position de la colonne de synthèse.
Solution: remplacer les réactifs, vérifier l'étanchéité à l'air de la ligne et recalibrer la position de la colonne de synthèse.
Pureté insuffisante du produit
Causes: méthode de purification incorrecte, étapes de synthèse incorrectes.
Solution: optimiser les conditions de purification (par exemple, augmenter les étapes de purification HPLC), vérifier que les paramètres de synthèse sont corrects.
Alarme ou interruption de l'instrument
Causes: bouteilles de déchets trop pleines, fluctuations de puissance, température anormale.
Solution: videz la bouteille de liquide usagé, utilisez une alimentation régulée et vérifiez si le capteur de température est défectueux.
Anomalies de données (p. ex. fluctuations de la valeur de Conductance)
Causes: contamination de la cellule de conductivité, mélange de réactifs avec des impuretés.
Solution: Lavez la cellule de conductivité, Remplacez le nouveau réactif et recalibrez.
Iv. Précautions opérationnelles
Environnement stérile: la synthèse des amorces est sensible à la contamination, il est nécessaire de porter des gants lors de la manipulation et d'éviter la contamination par l'ADN ou les enzymes exogènes.
Conservation des réactifs: les solvants tels que l'acétonitrile doivent être conservés à l'abri de la lumière, l'activateur et l'oxydant doivent être scellés pour empêcher l'humidité.
Enregistrement des données: enregistrement détaillé de la séquence synthétisée pour chaque lot, du numéro de lot du réactif, du profil de contrôle de qualité pour faciliter la traçabilité du problème.