Cellules souches mésenchymateuses du cordon ombilical(Huc - MSCs) est une cellule souche avec la capacité multipotentielle de différenciation extraite du cordon ombilical du nouveau - né. Les cellules souches mésenchymateuses dérivées du cordon ombilical conservent non seulement les caractéristiques biologiques des cellules souches mésenchymateuses (marqueurs antigéniques de surface, capables de se différencier en ostéoblastes, Chondrocytes et Adipocytes, etc.), mais sont également plus sûres et plus primitives que les cellules souches mésenchymateuses d'autres sources, avec une capacité accrue de prolifération, de différenciation et d'immunomodulation des cellules.
En outre, les cellules souches mésenchymateuses du cordon ombilical présentent également des caractéristiques telles que la séparation facile des matériaux, la faible immunogénicité, l'absence de restrictions éthiques morales, le nombre élevé de cellules disponibles, la production standardisée à grande échelle et d'autres, avec de vastes perspectives d'application clinique. Ce produit est soumis à des contrôles de qualité et des tests rigoureux qui garantissent sa sécurité et son efficacité.
(1) Lorsque la densité cellulaire atteint 80% - 90% peut être effectuée par passage (Notez que les cellules ne peuvent pas être trop denses, sinon elles peuvent facilement se différencier), éliminer le surnageant de culture et laver les cellules 1 - 2 fois avec dpbs sans ions calcium et magnésium;
(2) Ajouter 1 mL d'enzyme pancréatique recombinante dans le flacon de culture, laisser le suc digestif infiltrer toutes les cellules, placer dans un incubateur à 37 ° C pour la digestion pendant 1 - 3 min, observer au microscope jusqu'à ce que la plupart des cellules deviennent rondes et tombent (selon les cellules).
(3) Ajouter dans un tube de centrifugation stérile, centrifuger à 1000 RPM pendant 5 min, jeter 3 ml de milieu MSC pour terminer la digestion. Retirez doucement le surnageant et soufflez bien après avoir ajouté 1 - 2 ml de milieu MSC.
(4) passage dans un rapport de 1: 3 ou 1: 4 ou ensemencement après comptage cellulaire dans de nouveaux flacons de culture à une concentration de 5 - 8 × 103 cells / CM 2, après reconstitution avec le volume correspondant de milieu MSC, dans un incubateur à 37 ° C, 5% CO 2.
(5) changez le liquide tous les 2 - 3 jours, cultivez jusqu'à 2 - 4 jours pour que la densité de croissance cellulaire atteigne environ 80%, effectuez des opérations de transfert ou de congélation ultérieures.
Temps de digestion: la digestion des enzymes pancréatiques doit être contrôlée à environ 1 minute pour éviter les dommages cellulaires causés par une digestion excessive.
Densité d'inoculation: passer à l'échelle 1: 3 à 1: 4 de la surface de base, en évitant d'être trop dense ou trop diluée.
Sélection secondaire: l'utilisation de cellules secondaires de faible génération (p. ex., génération P2) est recommandée pour garantir l'efficacité de l'expérience.
Milieu spécialisé: utiliser un milieu spécialisé contenant des facteurs de croissance qui favorisent la prolifération et la différenciation cellulaires.