I. préparation avant régénération

　　Colonne de chromatographie liquide ultraPréparation avec les réactifs: préparation de solvants de qualité chromatographique tels que l'eau Ultrapure, le méthanol, l'acétonitrile, l'isopropanol, etc., ainsi que des flacons de collecte de déchets appropriés; Assurez - vous qu'il n'y a pas de fuite dans le corps de pompe du chromatographe liquide, la vanne d'admission.

Inspection de la colonne de chromatographie: avant la régénération, enregistrer l'effet actuel de la colonne de chromatographie, les données de crête, s'il y a des résidus de contaminants fortement retenus dans la colonne, il faut d'abord évaluer si la colonne de chromatographie a une valeur de régénération.

Opération sûre: porter des gants, des lunettes de protection pendant l'opération, éviter le contact des solvants organiques avec la peau; Garantir une bonne ventilation du laboratoire.

II. Étape de régénération universelle (colonne de chromatographie en phase inverse prédominante)

Rincer les résidus de phase mobile

Retirez la colonne de chromatographie et rincez avec de l'eau Ultrapure à faible débit (0,2 à 0,3 ml / min) pendant 30 à 60 minutes pour éliminer les impuretés solubles dans l'eau telles que le sel tampon et empêcher le dégagement de sel de boucher la charge.

Si la phase mobile contient des ions pour le réactif, il faut rincer avec une solution aqueuse de méthanol à 50% pendant 1 à 2 heures avant de passer au méthanol pur.

Elimine les polluants fortement hydrophobes

Les colonnes de chromatographie sont rincées successivement avec du méthanol à 100%, de l'acétonitrile à 100% avec un débit maintenu de 0,3 à 0,5 ml / min et un volume de rinçage de 20 à 30 fois le volume de la colonne pour chaque solvant.

Si le contaminant est têtu, vous pouvez choisir le rinçage à l'alcool isopropylique (Notez que la viscosité de l'alcool isopropylique est élevée, vous devez réduire le débit pour éviter une pression trop élevée de la colonne), après le rinçage avec une transition au méthanol.

Nettoyage des polluants polaires

Pour les colonnes de chromatographie contenant des impuretés polaires, rincer avec un mélange méthanol - eau (1: 1) pendant 60 minutes, puis avec du méthanol pur jusqu'au lissage initial.

Équilibre après régénération

Équilibrer la colonne de chromatographie avec la phase mobile de la méthode d'analyse cible, avec un volume d'équilibre d'au moins 10 fois le volume de la colonne, jusqu'à ce que la ligne de base soit stabilisée avant l'analyse de l'échantillon.

Iii. Précautions pour la régénération des colonnes de chromatographie de type spécial

Colonne de chromatographie en phase normale: rinçage au solvant aqueux désactivé, rinçage séquentiel au n - hexane, au dichlorométhane, à l'acétate d'éthyle lors de la régénération et enfin Conservation équilibrée au n - hexane.

Colonne de chromatographie échangeuse d'ions: d'abord rincée avec une solution tampon de pH correspondent, puis à l'eau désionisée jusqu'à neutralité et enfin conservée avec un tampon contenant 5% de méthanol.

Colonne de chromatographie chirale: préférez utiliser le solvant régénéré recommandé par le fabricant, évitez les solvants polaires forts et évitez la destruction de la phase stationnaire chirale.

Iv. Vérification et conservation après régénération

Vérification des performances:Colonne de chromatographie liquide ultraAprès l'achèvement de la régénération, les normes d'injection testent l'effet de la colonne, la symétrie du pic, si l'amélioration de la forme du pic, l'effet de la colonne est restauré à plus de 80% de son niveau d'origine, indiquant le succès de la régénération.

Conservation à long terme: la colonne de chromatographie en phase inverse est conservée hermétiquement avec du méthanol pur, la colonne de chromatographie en phase normale est conservée avec du N - hexane, les deux extrémités serrent la tête de blocage et sont placées dans un environnement à température normale et à l'abri de la lumière.