Dans les études d'expression génique, les microarn (miarn) posent des défis pour la détection quantitative par fluorescence conventionnelle en raison de leurs propriétés à chaîne courte (environ 22 nt de long). Comment quantifier avec précision ces molécules minuscules est une question clé pour les chercheurs scientifiques. À l'heure actuelle, la voie technologique dominante est divisée en méthode de boucle de tige et méthode de queue supplémentaire, les deux méthodes ont des milliers d'automne chacune, quel chemin choisir, en fonction des besoins spécifiques de l'expérience.

Techniquement, les deux sont conçus pour résoudre le puzzle de la conception des amorces de transcription inverse MIRNA.Méthode d'anneau de tigeLa transcription inverse a été réalisée à l'aide d'une amorce ayant une structure tige - anneau spéciale qui se lie spécifiquement à l'extrémité 3 'du MIRNA et augmente la longueur du produit de transcription inverse par sa structure tige - anneau, ce qui facilite les amplifications ultérieures par QPCR. Ses principaux avantages sontHaute spécificitéLa capacité de différencier efficacement les membres de la famille des miarn avec des séquences hautement homologues et même d'identifier les différences dans les bases individuelles est donc considérée comme l'étalon - or quantitatif.

EtMéthode AdditiveUne autre stratégie est alors utilisée: elle est d'abord transcrite à l'extrémité 3 'du miarn par polyA polymérase plus une chaîne de queue d'adénine (queue polyA), puis transcrite à l'aide de l'amorce générique Oligo (dt). Les caractéristiques de cette méthode sontOpération facile, flux élevéLa transcription inverse de tous les miarn est possible avec une seule réaction de queue supplémentaire, adaptée au dépistage à grande échelle ou à la pré - expérimentation de la taille de l'échantillon.

Dans les applications pratiques, la clé du choix est l'équilibreSpécificité et flux. Si l'objectif de l'étude est de valider un miarn spécifique et connu et qu'il existe des exigences strictes pour distinguer les nuances entre les membres de la famille (par exemple, le dépistage des marqueurs de la maladie), la méthode de l'anneau de tigeBonLa spécificité est un choix plus sûr. Par exemple, dans les services pertinents de détection quantitative par fluorescence des miarn, afin de garantir l'exactitude absolue des données sur l'expression des gènes individuels dans la recherche clinique ou la recherche scientifique fondamentale, les fournisseurs de technologie ont tendance à privilégier la méthode de l'anneau de tige.

Inversement, si l'étude est en phase de pré - découverte et nécessite la détection simultanée de profils d'expression de centaines de MIRNA dans un grand nombre d'échantillons, ou si la quantité totale d'ARN de l'échantillon est extrêmement limitée, la méthode d'addition peut fournir un aperçu plus rapide des données d'expression globales grâce à son processus opératoire court et à la faible quantité d'ARN requise.

En résumé, la méthode de l'anneau de la tige et la méthode de l'addition de la queue ne sont pas des relations alternatives, mais des moyens techniques complémentaires. Les choix judicieux découlent d'une perception claire des objectifs de l'expérience: rechercher la précision des données individuelles ou explorer le panorama expressif d'un groupe. Ce n'est qu'en tenant compte des besoins spécifiques que l'on peut choisir la bonne voie vers des résultats fiables.

Services de détection quantitative par fluorescence MIRNA

Présentation du produit

Real Time PCR， PCR quantitative par fluorescence en temps réel, également appelée PCR quantitative ou QPCR,Est une réaction d'amplification de l'ADN, mesurée avec des produits chimiques fluorescents à chaque foisRéaction en chaîne par polymérase(PCR) Méthode pour la quantité totale de produit après le cycle. Méthode d'analyse quantitative d'une séquence d'ADN particulière dans un échantillon à mesurer par Ginseng interne ou externe

Parce que la PCR quantitative a les avantages de la simplicité d'utilisation, de la rapidité et de la commodité, de la sensibilité élevée, de la bonne Répétabilité et du faible taux de contamination, elle est largement utilisée dans divers domaines tels que les tests médicaux, l'évaluation de l'efficacité des médicaments, la recherche sur l'expression génétique, la recherche sur les OGM, les tests génétiques, la détection d'agents pathogènes, la détection des animaux et des plantes, la détection des aliments, etc.

Principes expérimentaux

La technique dite de PCR quantitative par fluorescence en temps réel, qui se réfère à la méthode consistant à incorporer des groupes fluorescents dans le système réactionnel PCR, à surveiller l'ensemble du processus PCR en temps réel en utilisant l'accumulation de signaux fluorescents et enfin à effectuer une analyse quantitative de gabarits inconnus via une courbe standard

Aperçu des types de techniques de PCR quantitative par fluorescence en temps réel: méthode de colorant lié à l'ADN, méthode chimique à base de sondes, méthode d'amorce de colorant éteint

Applications expérimentales

Quantification de l'ADN et de l'ARN; Vérification de l'expression génétique; Identification allélique; Typage SNP; Détection de pathogènes et de virus; PCR multiple

Résultats expérimentaux