Préparation de l'équipement: Vérifiez l'alimentation électrique du Shaker co₂, la connexion de la source de gaz (cylindre co₂) est correcte et assurez - vous que la pression de la soupape de décompression co₂ est stable (généralement 0,1 ~ 0,2 MPa). Allumez l'appareil, Préchauffez - le à une température définie (par exemple 37 ° c) et Préchauffez le bac à eau à l'intérieur de l'incubateur pour maintenir l'humidité.

Réglage des paramètres: réglage de la concentration en co₂ (généralement 5%) en fonction des besoins cellulaires, étalonnage par capteurs infrarouges ou à conductivité thermique; La plage de température de réglage est généralement de la température ambiante à 50 ℃, il est nécessaire de préchauffer à l'avance pour éviter les fluctuations de température; Ajustez la vitesse de rotation (50 ~ 300RPM) et l'amplitude (généralement 5 ~ 50mm) selon le récipient de culture pour éviter les éclaboussures de liquide; Le bac à eau est ajouté avec de l'eau distillée stérile et maintient une humidité ≥ 95%.

Placement de l'échantillon: le récipient doit être scellé (par exemple, en utilisant une membrane de bouchon respirante ou en serrant le bouchon du flacon) pour empêcher le co₂ de s'échapper et de se contaminer; Balancez l'échantillon pour éviter que le déplacement du Centre de gravité affecte le fonctionnement du shaker.

Surveillance du fonctionnement: vérifier périodiquement la concentration de co₂, la température est stable, enregistrer les paramètres de fonctionnement; La perméabilité au co₂ doit être équilibrée lors de l'utilisation d'un bouchon respirant pour la culture ou le scellement du flacon.

Fin de fonctionnement: éteindre la source de gaz co₂, arrêter après que la concentration à réduire à 0%, éviter les dommages au capteur; Nettoyez les disques d'eau et les cavités pour empêcher les microbes de se reproduire.

II. Guide des meilleures pratiques en culture cellulaire

Sélection du type de cellule par rapport au milieu de culture: le milieu de culture approprié est choisi en fonction du type de cellule, comme le dmem pour les lignées cellulaires à prolifération rapide et le mem pour de nombreux types de cellules; Les cellules primaires ont besoin d'ajouter des facteurs de croissance spéciaux.

Réanimation cellulaire et cryopréservation: décongeler rapidement les cellules lors de la réanimation et réduire les dommages causés par les cristaux de glace; Ajouter un cryoprotecteur (par exemple 10% de DMSO) au moment de la congélation et transférer à l'azote liquide après refroidissement lent à - 80 ° c.

Opérations aseptiques: toutes les opérations sont effectuées à l'intérieur d'une table de travail ultra - propre, portant une combinaison expérimentale, des gants, un masque et un chapeau; Évitez de parler et de tousser dans la zone d'opération et réduisez le risque de propagation des micro - organismes dans l'air.

Observation et enregistrement réguliers: la croissance cellulaire est observée régulièrement au microscope, y compris la morphologie cellulaire, la densité de croissance, avec ou sans contamination; Les données pertinentes sont enregistrées afin que les anomalies puissent être détectées et traitées à temps.

Maintenance et étalonnage de l’équipement: étalonnage régulier du capteur co₂ (tous les 6 mois), remplacement de la membrane filtrante (le cas échéant); Mise hors tension pendant le nettoyage pour éviter l'entrée de liquide dans le système de circuit.