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Etudes sur les exosomes carters? Simple Western double l'efficacité de la détection
Date :2025-10-21Lire :0
Exosomes (exosomes)Sont de petites nanoparticules lipidiques dérivées d'endosomes, d'environ 30 à 200 nanomètres de diamètre, que la plupart des cellules vivantes sécrèteront activement par l'action de l'exosomie[1]. que ce soit dans un état pathologique ou physiologique, la libération des exosomes peut être à la fois persistante et induite, et le processus de libération est dynamique, contrôlable et fonctionnellement pertinent. La composition moléculaire et la quantité d'exosomes libérés dépendent de l'état des cellules dont ils proviennent. Les exosomes peuvent être obtenus de manière isolée à partir d'une variété de lignées cellulaires, de cultures primaires et peuvent également être extraits de liquides d'organismes tels que le sérum, le plasma, la salive, etc. Compte tenu de la diversité des sources, les exosomes ont des fonctions physiologiques multifonctionnelles et de plus en plus d'études montrent qu'ils jouent un rôle important dans de nombreux états pathologiques tels que le cancer, les maladies infectieuses, les maladies neurodégénératives, etc. Ainsi, les exosomes deviennent des sujets de recherche clés dans les méthodes de biopsie liquide[2]. En outre, les exosomes peuvent également être modifiés par l'ingénierie pour devenirTransporteurs potentiels de livraison de médicaments[3]- Oui.
En raison de la petite taille des exosomes, il est difficile de les séparer d'une matrice biologique complexe et les rendements de séparation sont généralement faibles.Dans ce contexte, Simple Western ™ Devient la technologie idéale pour étudier les exosomes: avec seulement 3 microlitres d'échantillon et une sensibilité de niveau pick - up, cette méthode réduit considérablement les exigences de Western Blot traditionnel pour le volume d'exosomes requis.Par la suite, ils peuvent être caractérisés à l'aide d'une aiguille pour détecter des anticorps spécifiques d'antigènes liés aux exosomes - ces antigènes cibles peuvent être à la fois des marqueurs génériques des exosomes et des marqueurs appartenant à la cellule ou au Fluide corporel dont ils proviennent. Dans ce protocole expérimental, nous utiliserons des standards exosomiques et des anticorps disponibles dans le commerce via simple Western. ™ Détection d'un marqueur générique des exosomes et d'un marqueur spécifique de la source.
Cet article présente les résultats validant l'efficacité des anticorps dans le tableau ci - dessous, pour les trois critères exosomiques "Plasma humain, sérum humain, cellules A549 humaines (cellules adénocarcinomes baso - épithéliaux alvéolaires)":
01. Expression de marqueurs exosomiques universels
• flotillin - 1: en tant que marqueur générique classique, détecté dans les trois critères (figure 1a).
• Alix: exprimé dans les trois critères, mais en plus grande quantité dans les exosomes d'origine cellulaire A549 (figure 1d).
02. Expression de marqueurs spécifiques de la source
• annexine V: en tant que marqueur d’apoptose avec la protéine anticoagulante du sang, détectée dans les cellules A549, les exosomes d’origine plasmatique et non dans les exosomes d’origine sérique (figure 1B).
• EGFR (her1): détecté uniquement dans les exosomes d’origine cellulaire A549, sans signalisation dans le sérum, les exosomes d’origine plasmatique (Figure 1c).
Figure 1 Utilisation de simple Western ™ Test de l'antigène cible exosomal. A：flotillin-1； B：Annexin V； C：EGFR； D：Alix。
03. Marqueurs des besoins de traitement spéciaux
• cd63: le signal n’est détectable qu’après traitement de l’étalon exosomal par la pngase F (déglycosylase), suggérant l’effet de la modification glycosylée sur la détection de ce marqueur (Figure 2).
04. Vérification des autres marqueurs
Les anticorps restants du tableau 2 (par exemple, Annexin A2, hspa8 / Hsc70, tsg101, etc.) ont tous été validés par simple Western et peuvent détecter un signal cible dans les étalons d'exosomes correspondants (Figure 2).
Figure 2. Vue de la piste de détection de chaque antigène cible dans un étalon exosomal d'origine plasmatique et cellulaire A549.
- valeurs fondamentales de la technologie simple Western -
(1) Micro haute efficacité:Seulement 3 - 5 μl de lysat d'exosomes (50 μl + requis pour le WB traditionnel), adapté aux échantillons précieux; Le processus capillaire complet réduit la perte d'échantillon et convient aux protéines membranaires de faible abondance.
(2) haute sensibilité: limite inférieure de détection au niveau du picogramme, peut mesurer cd63 / Alix, etc., par traitement pngase F pour craquer l'interférence de glycosylation, réaliser une détection spécifique telle que l'EGFR.
(3) Interférence anti - matrice: 12 - 230kda électrophorèse capillaire désaxé, après la lyse des exosomes peut être directement sur l'appareil, sans purification fastidieuse.
(4) Quantification multiple: mesure synchrone de 8 cibles sur un seul échantillon, conforme à la norme misev, plage dynamique couvrant 6 ordres de grandeur.
(5) processus automatisé: 3 heures d'automatisation complète des résultats, réduisant la dégradation des protéines; Contrôle de qualité indépendant par puits pour répondre au QC de préparation du Système exocrine.
(6) quantification précise: soutenir la quantification absolue / relative, faible taille d'échantillon + haute répétabilité, développement de marqueurs de biopsie liquide adaptés, accélérer la recherche scientifique à la transformation clinique.
* Cet article est tiré de « proteinsimple » Wechat public
* Références:
1. Exosomes, D M Pegtel et S J Gould, Examen annuel de la biochimie, 2019, 88:487–514.
2. Vésicules extracellulaires – biomarqueurs et effecteurs de l’interatome cellulaire dans le cancer, J Rak, Frontières en pharmacologie, 2013, 4:21.
3. Exosomes comme systèmes thérapeutiques reconfigurables, R Conlan, S Pisano, M Oliveira, M Ferrari et I Mendes Pinto, Tendances en médecine moléculaire, 2017, 23(7):636–650.
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