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Shanghai Jintong Instrument Co., Ltd
De la base à l'avancée: guide d'utilisation du microscope inversé Leica
Date :2025-07-18Lire :0
Microscope inversé LeicaGrâce à sa configuration d'objectif flexible, sa conception de banc de transport adapté à une grande variété d'échantillons, il devient un outil de recherche dans les domaines de la culture cellulaire, de la coupe de tissus, de la science des matériaux et bien plus encore. Maîtrisez ses compétences opérationnelles pour améliorer l'efficacité expérimentale et prolonger la durée de vie de l'instrument. Ce qui suit va des opérations de base aux astuces avancées, détaillées en étapes.
I. opérations de base: démarrage de la spécification et observation de l'échantillon
1. Démarrage et préparation de l'environnement
Après avoir allumé l'alimentation, allumez l'interrupteur d'alimentation de l'hôte du microscope, à ce que le champ de vision de l'oculaire s'allume, Allumez la source de lumière fluorescente (pour l'observation fluorescente). Remarque: la source de lumière fluorescente doit être préchauffée pendant 5 à 10 minutes pour atteindre une intensité lumineuse stable et éviter les interrupteurs fréquents pour prolonger la durée de vie de l'ampoule.
Ajustez la base du microscope à un état stable et évitez les chocs qui affectent l'imagerie (il est recommandé de placer sur une table antichoc ou un tapis en caoutchouc épais).
2. Placement d'échantillon et mise au point
Placez la boîte de pétri, la plaque poreuse ou la lame de verre au centre de la table, en veillant à ce que l'échantillon se trouve directement sous l'objectif (l'objectif du microscope inversé est orienté vers le haut et l'échantillon est placé par le haut).
Utilisez d'abord un objectif à faible facteur de grossissement, tel que 4x ou 10x: Descendez lentement l'objectif à proximité de l'échantillon (en prenant soin d'éviter le toucher) à l'aide du bouton de grossissement, puis tournez lentement à l'envers jusqu'à ce que l'image soit nette. Lors de la commutation de l'objectif haute fois (par exemple, 20x, 40x), vous devez affiner le bouton de réglage fin, car la distance de travail de l'objectif est courte, l'opération doit être plus douce.
3. Chemin optique et régulation de l'imagerie
Réglage de la hauteur du concentrateur par rapport à la taille de l'ouverture: lors de l'observation du miroir à faible facteur, la position du concentrateur est inférieure et l'ouverture est ajustée; Lorsque vous avez besoin d'augmenter le condenseur et de réduire l'ouverture pour améliorer le contraste.
Ajustez le bouton de mise au point grossière / fine jusqu'à ce que l'image soit la plus nette grâce à l'observation oculaire et évitez que la mise au point excessive endommage l'objectif ou l'échantillon.
Techniques avancées: extension fonctionnelle et imagerie de précision
1. Observation fluorescente et commutation de canal
Pour l'imagerie par fluorescence, vérifiez d'abord que le bloc de filtre a été commuté sur le canal de fluorescence cible (par exemple, dapi, FITC, TRITC), en opérant via le Carrousel du bloc de filtre sur le côté du microscope.
Réglage de l'intensité lumineuse de l'excitation fluorescente: Évitez l'extinction de la fluorescence causée par une surbrillance, vous pouvez améliorer progressivement l'intensité lumineuse par le bouton de réglage de la tension ou le contrôle du logiciel (si vous connectez un ordinateur) jusqu'à ce que le signal soit clair et le bruit de fond faible.
2. Différence et imagerie DIC
Observation de la différence: insérer un anneau de différence (doit correspondre à l'objectif, comme un objectif 10x correspond à un anneau de différence 10x), ajuster la position de la plaque de phase du condenseur et améliorer le contraste des échantillons non colorés, tels que les cellules vivantes.
Observation DIC (Differential Interference Contrast): installez un prisme DIC pour mettre en évidence les structures subtiles de l'échantillon (par exemple, Cytosquelette, bords de membrane cellulaire) en ajustant l'angle de polarisation du prisme avec un bouton de réglage de l'intensité lumineuse.
3. Acquisition d'images et optimisation des paramètres
Si vous connectez un appareil photo numérique, définissez le temps d'exposition et les valeurs de gain via un logiciel tel que Leica application suite: le temps d'exposition doit être réduit (pour éviter la surexposition) sous un miroir plus élevé, et l'imagerie cellulaire vivante peut augmenter le gain de manière appropriée pour améliorer la luminosité.
Lors de prises de vue multicanaux, des images en champ clair, fluorescentes ou décalées doivent être prises séparément et superposées ou analysées par contraste dans le logiciel pour s'assurer que les paramètres sont cohérents (comme le même champ de vision, le même temps d'exposition).
Iii. Entretien et précautions
1. Nettoyage de l'objectif: utilisez du papier d'objectif spécial ou des ballons soufflés pour nettoyer la poussière de la surface de l'objectif et éviter tout contact direct avec l'objectif; En cas de contamination par des liquides, Essuyer délicatement avec de l'éthanol absolu.
2. Entretien de la table de chargement: évitez les échantillons tranchants de rayer la surface de la table de chargement, nettoyez le milieu de culture résiduel ou le liquide en temps opportun après utilisation.
3. Processus d'arrêt: éteignez la source de lumière fluorescente (besoin de refroidir à la température ambiante après la mise hors tension), tournez l'objectif à la position de facteur inférieur (éviter la compression à long terme de l'objectif de facteur supérieur), et enfin éteignez l'alimentation de l'hôte.
Microscope inversé LeicaLes opérations vont de la mise au point de base à l'imagerie avancée, où chaque étape doit tenir compte des spécifications et des détails. Maîtrisez ses compétences de base, non seulement pour obtenir efficacement des images de haute qualité, mais aussi pour tirer pleinement parti des performances de l'instrument et fournir un soutien fiable à la recherche scientifique et à l'expérimentation.