La plaque de chromatographie en couche mince de silicone H (silicagelhthin layerchromatographyplate, ou plaque TLC) est un outil d'analyse couramment utilisé, largement utilisé dans des domaines tels que la chimie, la pharmacie et d'autres pour isoler et analyser la composition de différentes substances. La chromatographie sur couche mince (TLC) est une technique de séparation basée sur la différence de répartition des substances entre les phases stationnaire et mobile. Voici les étapes de base de la méthode expérimentale de plaques de chromatographie en couche mince de plaques de silice H:
Matériel et équipement
Plaque de chromatographie en couche mince de silice H (silicagelhtlcplate)
Système solvant (phase mobile, généralement un mélange de solvants)
Solution d'échantillon
Réactifs de pulvérisation (par exemple, ammoniaque, détecteur de lumière ultraviolette, etc.)
Fentes de développement (par exemple fentes en verre)
Capillaire (pour échantillon ponctuel)
Lampes UV ou autres agents de rendu des couleurs (par exemple, vapeur d'iode pour le rendu des couleurs)
Pipettes, cylindres de mesure, etc.
Étapes expérimentales
1. Préparer la carte TLC
Coupez la plaque de silicone H, généralement choisissez la taille appropriée, généralement une petite plaque de 2,5 cm x 7,5 cm.
Utilisez un crayon pour marquer délicatement la ligne de départ (généralement à 1 - 2 cm du bas de la plaque), qui est l'endroit où l'échantillon est prélevé.
2. Préparer la solution d'échantillon
Les échantillons à analyser sont dissous dans un solvant approprié à une concentration généralement comprise entre 1 et 5 mg / ML. Faites attention à la compatibilité du solvant avec la phase mobile lors de son utilisation.
3. Un échantillon
Utilisez un capillaire pour placer soigneusement la solution d'échantillon à la position de la ligne de départ de la plaque TLC. Lors de l'échantillonnage, chaque échantillon doit attendre que le solvant se volatilise et propre pour éviter l'excès d'échantillon.
Plusieurs échantillons peuvent être prélevés, mais gardez une distance appropriée entre eux pour éviter une séparation incomplète.
4. Préparer le réservoir de développement et le solvant
Ajouter la bonne quantité de phase mobile (solvant) dans le bain de développement du verre. Le choix de la phase mobile doit être fait en fonction de la polarité de la substance cible, les systèmes de solvants courants tels que les mélanges de n - hexane, d'acétate d'éthyle, de chloroforme, de méthanol, etc.
Le niveau du solvant doit être inférieur à la ligne de départ de la plaque TLC afin que l'échantillon ne soit pas dissous par le solvant.
5. Développement (séparation)
Placez la plaque TLC revêtue de l'échantillon verticalement dans le bac de développement, en veillant à ce que le fond de la plaque soit immergé dans le solvant mais ne touche pas les points de l'échantillon.
Laissez le solvant remonter le long de la plaque TLC et séparez l'échantillon avec vous. Le développement cesse lorsque le Front de solvant s'élève vers le Sommet de la plaque.
Si nécessaire, un dispositif de condensation peut être utilisé pour maintenir la vapeur de solvant à l'intérieur de la cuve, ce qui rend le processus de développement plus uniforme.
6. Enlever et sécher
Retirez la plaque TLC de la fente de développement et marquez au crayon où se trouve le Front de solvant.
Placez la plaque TLC dans l'air ou séchez - la à l'aide d'un four, en vous assurant que le solvant est complètement volatilisé.
7. Détection
Si l'échantillon a des propriétés d'absorption UV, la plaque TLC peut être illuminée directement avec une lampe UV pour observer l'emplacement des taches séparées.
Si l'échantillon n'est pas absorbant dans les UV, la réaction de rendu des couleurs peut être effectuée à l'aide d'un spray de réactif de rendu des couleurs (par exemple, ammoniaque, vapeur d'iode, réactif contenant du soufre, etc.).
Différentes taches peuvent être vues en regardant sous un rendu des couleurs ou une lampe UV, et la vitesse de déplacement des taches (valeur RF) peut être utilisée pour identifier la substance.
8 résultats de l'analyse
La valeur de RF (distance de migration de la tache / distance de migration du Front de solvant) de chaque spot isolé est mesurée et analysée en alignant les valeurs de RF des substances étalons connues.
Précautions
Choix du solvant: selon les différentes substances, le système de solvant approprié est choisi pour assurer un bon effet de séparation.
Quantité et précision de l'échantillon ponctuel: la quantité d'échantillon ponctuel ne doit pas être excessive, ce qui évite la dissolution incomplète de l'échantillon ou la présence de taches trop grandes qui rendent difficile la résolution.
étanchéité de la cuve de développement: Assurez - vous que la cuve de développement est bien étanche et évitez l'évaporation trop rapide du solvant.
Environnement expérimental: pendant l'expérience, évitez les secousses et les courants d'air excessifs afin de ne pas affecter l'effet de séparation.
Grâce à ces étapes, vous pouvez effectuer des expériences de chromatographie en couche mince avec des plaques de silice H, isoler et analyser avec succès des échantillons complexes.