Le flux de travail est le suivant:

Focalisation laser: un faisceau laser de bonne monochromaticité est focalisé sur un plan focal spécifique de l'échantillon, excitant la sonde fluorescente pour produire de la fluorescence.

Criblage de trou d'épingle: seul le signal Fluorescent sur le plan focal peut traverser le trou d'épingle devant le détecteur, et la lumière parasite du plan non focal est bloquée par le trou d'épingle, ce qui permet d'obtenir un contraste d'image plus élevé.

Imagerie par balayage: le faisceau laser balaye l'ensemble du plan focal point par point, ligne par ligne, et l'ordinateur recueille le signal et reconstruit une image en deux dimensions. En déplaçant l'échantillon le long de l'axe Z, une série de tranches de différentes profondeurs est acquise, puis une image stéréoscopique tridimensionnelle de l'échantillon peut être reconstituée.

Microscope confocal au laserPrincipales caractéristiques:

Haute résolution vs contraste: exclut efficacement les interférences du plan afocal, la résolution latérale peut atteindre environ 120 - 200 nm et la qualité d'imagerie est bien supérieure à celle des microscopes à fluorescence à large champ traditionnels.

Imagerie stéréoscopique 3D: l'échantillon peut être "découpé optiquement" sans découpe physique et la structure 3D est reconstituée par logiciel pour révéler clairement la morphologie spatiale de l'échantillon.

Imagerie de fluorescence multicolore: peut être équipé d'un laser à plusieurs longueurs d'onde tout en excitant différentes sondes fluorescentes dans l'échantillon, en distinguant différentes structures cibles sur la même image.

Observation dynamique des cellules vivantes: les dommages à l'échantillon sont faibles et peuvent suivre les processus physiologiques dynamiques à l'intérieur des cellules vivantes pendant une longue période en temps réel dans des environnements tels que le contrôle de la température, le contrôle de l'humidité et d'autres.

Capacité d'analyse puissante: le logiciel compagnon peut effectuer de nombreux traitements de données tels que l'amélioration de l'image, le comptage cellulaire, la quantification de l'intensité de fluorescence, l'analyse de co - localisation et bien plus encore.