L'agent de pilule est une poudre fine de médicament ou un extrait de médicament plus un liant ou un excipient approprié, fait de la forme sphérique ou sphérique de la préparation solide, qui est l'une des anciennes formes posologiques de la médecine chinoise. Le Protocole de test d'ADN de PCR est en train de devenir la norme d'or pour l'identification de l'authenticité et de l'authenticité des produits pharmaceutiques chinois, mais après le traitement des pilules chinoises en raison de la composition complexe, y compris les adhésifs et les Excipients ont un effet inhibiteur sur la réaction de PCR, ce qui conduit à des méthodes de test d'ADN qui ne peuvent pas être utilisées efficacement dans ce domaine. Ce kit permet d'obtenir une pureté d'extraction efficace de l'ADN grâce à une méthode d'extraction de l'ADN développée de manière autonome qui effectue un nettoyage efficace de certains composants inhibiteurs de PCR. L'ADN extrait peut être utilisé directement dans les réactions de PCR, fournissant un Protocole de détection fiable pour l'identification de l'authenticité et de l'usurpation des médicaments.
Traitement de craquage:
Broyer les pilules en poudre, ajouter un lysat contenant de la protéase K (comme le tampon CTAB), bain - Marie à 56 ° C pendant 1 - 2 heures, détruire les membranes cellulaires et dégrader les protéines. Si l'échantillon contient des polysaccharides, le bêta - mercaptoéthanol peut être ajouté pour inhiber l'interférence.
Purification par adsorption:
Méthode des billes magnétiques: le lysat est mélangé avec des billes magnétiques et, après Adsorption spécifique de l'ADN, les impuretés sont éliminées avec un liquide de lavage contenant des sels ionisés.
Méthode de la colonne de centrifugation: le lysat est passé sur une colonne de membrane de gel de silice et après la liaison de l'ADN, les sels et les pigments sont lavés à l'éthanol.
élution et contrôle de qualité:
L'ADN est élué avec du tampon te ou de l'eau stérile et le Spectrophotomètre UV détecte le rapport a260 / A280 (1,8 - 2,0 est qualifié). L'intégrité de la bande est observée par électrophorèse pour éviter le traînage ou la dispersion.
Précautions:
Porter des gants tout au long de l'opération pour éviter la contamination par les enzymes ADN.
Lorsque la teneur en Polysaccharides est élevée, le nombre de lavages peut être augmenté ou la méthode à faible pH peut être utilisée.
Les échantillons obsolètes nécessitent un temps de lyse prolongé.