Le principe du kit ELISA (enzyme - linked immunosorption Assay) repose principalement sur la liaison spécifique d'un antigène à un anticorps et sur l'action catalytique d'une enzyme qui colore le substrat par réaction chimique, puis l'analyse qualitative ou quantitative en fonction de la nuance de couleur. Voici quelques types courants de principes de kits ELISA:
Méthode sandwich à double anticorps
Principe: À l'aide de deux anticorps dirigés contre différents déterminants de l'antigène, un anticorps est d'abord encapsulé à la surface d'un support en phase solide, tel qu'une microplaque en polystyrène, pour capturer l'antigène, appelé anticorps de capture. Après addition de l'échantillon à détecter, l'antigène de l'échantillon se lie spécifiquement à l'anticorps de capture sur le support en phase solide. Un autre anticorps marqué à l'enzyme, capable de se lier à un autre épitope différent de l'antigène déjà lié à l'anticorps de capture, est ensuite ajouté pour former un complexe immunologique "anticorps - antigène - anticorps de référence enzymatique". Enfin, le substrat de l'enzyme est ajouté et l'enzyme catalyse la réaction chimique du substrat qui produit un changement de couleur dont la profondeur est proportionnelle à la quantité d'antigène dans l'échantillon.
Champ d'application: couramment utilisé pour détecter les antigènes macromoléculaires tels que les protéines, les Polypeptides, etc., il est largement utilisé pour détecter les antigènes pathogènes, les marqueurs tumoraux, etc.

Méthode indirecte
Principe: l'antigène est d'abord encapsulé sur un support en phase solide, puis un échantillon à détecter contenant des anticorps est ajouté, les anticorps de l'échantillon se liant spécifiquement à l'antigène sur le support en phase solide. Après lavage pour éliminer les substances non liées, on ajoute un bis - anti - immunoglobuline humaine ou animale marquée enzymatiquement, le bis - anti se liant à un anticorps spécifique déjà lié à l'antigène pour former un complexe "antigène - anticorps - bis - anti - enzyme marquée". Après addition du substrat, l'enzyme catalyse la coloration du substrat, la nuance de couleur étant corrélée à la teneur en anticorps de l'échantillon.
Champ d'application: il est principalement utilisé pour détecter divers anticorps, tels que la détection d'anticorps pathogènes dans le sérum humain pour déterminer si l'agent pathogène correspondant a été infecté ou la détection d'auto - anticorps pour le diagnostic de maladies auto - immunes, etc.
Droit de la concurrence
Principe: l'antigène spécifique et l'anticorps de l'échantillon à détecter sont ajoutés simultanément dans un vecteur de phase solide déjà encapsulé dans l'anticorps, l'anticorps de l'échantillon et l'antigène étalon de l'enzyme étant en compétition pour lier l'anticorps sur le vecteur de phase solide. Si le taux d'anticorps dans l'échantillon est élevé, les chances de se lier à l'anticorps en phase solide sont grandes et les chances de se lier à l'antigène étalon de l'enzyme sont faibles; Inversement, si le taux d'anticorps dans l'échantillon est faible, il y a plus de chances que l'antigène étalon enzymatique se lie à l'anticorps en phase solide. Le substrat est ajouté après le lavage, plus l'antigène étalon de l'enzyme se lie à l'anticorps en phase solide, plus le substrat catalysé par l'enzyme est foncé, tandis que la teneur en anticorps dans l'échantillon est inversement proportionnelle à la nuance de couleur.
Champ d'application: convient pour la détection de petites molécules d'antigènes ou d'haptènes, tels que la détection de résidus de médicaments, d'hormones, etc., peut également être utilisé pour détecter des échantillons avec une faible puissance d'anticorps.
Loi sur la concurrence antigénique
Principe: l'anticorps spécifique est d'abord encapsulé sur un support en phase solide, l'échantillon à détecter et une certaine quantité d'antigène étalon enzymatique sont ajoutés, l'antigène de l'échantillon et l'antigène étalon enzymatique sont en compétition pour lier l'anticorps sur le support en phase solide. Après lavage, le substrat est ajouté pour la réaction de rendu des couleurs, plus la teneur en antigène dans l'échantillon est élevée, moins il y a d'antigène de référence enzymatique lié à l'anticorps en phase solide et plus la couleur est claire, c'est - à - dire que la teneur en antigène dans l'échantillon est inversement proportionnelle à la nuance de couleur.
Champ d'application: couramment utilisé pour la détection de petites molécules de substances antigéniques, telles que la détection de résidus de pesticides, de résidus de médicaments vétérinaires, etc.