Yu Heavy Technology - applications pour l'industrie

Le chromatographe liquide (HPLC) est l'un des instruments de test couramment utilisés dans les laboratoires d'analyse et ses applications sont de plus en plus répandues. Lors de l'utilisation de cet instrument, il est inévitable que des problèmes de toutes sortes surviennent et auront un impact direct sur la précision des données mesurées et le bon fonctionnement de l'instrument. Si l'opérateur peut comprendre l'origine des défauts, il peut clairement prévenir et résoudre ces problèmes, il peut utiliser l'instrument correctement et utiliser les performances de l'instrument à grande échelle. Aujourd'hui, nous voulons partager avec vous quelques questions à noter dans l'utilisation d'un chromatographe liquide à partir des aspects suivants.

Protocole d'analyse de composition | Protocole d'analyse de surface | système de traitement avant échantillon | Protocole d'analyse de surface | essais de dureté | essais mécaniques | échantillons standard

I. problèmes liés à l'utilisation de tubes à essai

1, problème de nettoyage du tube à essai. La chromatographie liquide est une méthode d'analyse sensible qui peut affecter la précision des résultats d'essai si elle est due à l'utilisation de tubes impurs. Par example, lors de la dissolution d'un échantillon avec du méthanol comme solvant, le petit tube à essai utilisé est recouvert d'un bouchon en caoutchouc, de sorte qu'à chaque entrée d'échantillon, il existe un pic perturbateur fixé en temps de rétention, qu'il a été vérifié par la suite que ce pic perturbateur résulte de La dissolution des Constituents par trempage du méthanol dans le bouchon en caoutchouc, le pic perturbateur étant éliminé après remplacement par un tube en verre.

2, problème de dissolution du tube à essai en plastique. Ces dernières années, les tubes à essai en plastique à usage unique ont apporté une grande commodité aux Testeurs, mais lors de l'utilisation, il est important de prêter attention au phénomène de dissolution du tube par un solvant organique, lors de l'extraction de l'échantillon à l'aide de tels tubes, certains solvants organiques (tels que lvfang, etc.) ont un phénomène de dissolution de la paroi du tube, ces substances dissoutes peuvent parfois générer un signal sur le détecteur, ce qui interfère avec la détermination de l'échantillon. À ce stade, les mêmes conditions expérimentales peuvent être testées pour voir si le liquide extrait peut produire un signal d'interférence sur le détecteur lorsqu'il ne contient pas d'extrait, s'il existe un signal d'interférence, il ne peut être remplacé que par un tube en verre résistant aux solvants organiques.

3, problème d'adsorption de l'échantillon testé sur la paroi du tube à essai. Ce problème devrait également être noté, sinon il affectera également la précision des résultats des tests, dans la surveillance thérapeutique des médicaments (TDM), certains médicaments testés tels que l'amitriptyline, l'Imipramine et d'autres sont facilement adsorbés sur la paroi du tube du tube à essai en verre, de sorte que le fonctionnement est approprié d'utiliser un tube en polypropylène, afin d'éviter l'apparition du phénomène d'adsorption dans l'extraction, peut utiliser 0,5% de liquide déjà diamine comme agent d'extraction, peut efficacement empêcher l'adsorption.

II. Problèmes de fonctionnement de la vanne d'admission

À l'heure actuelle, la vanne d'admission couramment utilisée dans les chromatographes liquides analytiques est la vanne d'admission de type 7725, dont la structure interne de vanne à six voies rend le fonctionnement de l'échantillon très pratique, mais peut également poser des problèmes si elle n'est pas utilisée correctement. Par example, au cours d'essais en chromatographie liquide, il se pose parfois des problèmes d'apparition de pics chromatographiques anormaux et de mauvaise reproductibilité, dus principalement à des modes opératoires inappropriés, et pour résoudre ces problèmes, il faut commencer par les aspects suivants.

1, contrôle de la quantité d'échantillon. Lors de l'admission d'un échantillon à l'aide d'une vanne d'admission, l'anneau d'échantillon à l'intérieur de la vanne est quantitatif (le volume de l'anneau d'échantillon de la vanne d'admission de type analytique général est de 20 µl), car la solution d'échantillon injectée à l'intérieur de la vanne d'Admission présente un gradient de vitesse radial dans la ligne de l'anneau d'échantillonnage (c'est - à - dire que le débit de liquide à l'axe du tube est plus rapide que celui de la paroi du tube) lors Par conséquent, pour que l'anneau d'échantillon soit rempli de solution d'échantillon, de sorte que la vanne d'admission soit utilisée pour une quantification précise, il faut que la quantité d'échantillon soit supérieure à 2 fois le volume de l'anneau d'échantillon. Si la quantité d'échantillon est contrôlée à l'aide d'une seringue, zui Big ne peut injecter qu'une quantité de 1 / 2 du volume de l'anneau de l'échantillon, ce qui évite qu'une partie de l'échantillon ne déborde par le tube de trop - plein, ce qui entraîne des erreurs dans l'analyse quantitative.

2, problème de nettoyage de la vanne d'admission. S'il y a un résidu de l'échantillon dans l'anneau de l'échantillon lors de la dernière entrée, il est nécessaire de contaminer l'échantillon lors de l'injection suivante, afin d'éviter que ce phénomène ne se produise, vous devez procéder comme suit: A. la vanne d'admission a 2 positions, Inject et load. Tout d'abord dans la position load, injecter la phase mobile dans la vanne d'admission pour le nettoyage à plusieurs reprises avec une seringue, chaque fois avec une dose d'environ 40 µl; B. ensuite, lorsque la plaque de vanne d'admission est clé à la position Inject, laver plusieurs fois avec la phase mobile, chaque fois avec une dose de 40 µl; C. après Zui, injecter l'échantillon dans la vanne d'admission.

En suivant les étapes décrites ci - dessus, il est possible d'éviter la contamination causée par la vanne d'admission, ce qui permet d'éliminer les pics perturbateurs et d'améliorer la précision des résultats d'analyse.

3, blocage du tuyau de trop - plein de la vanne d'admission. Parfois, le phénomène de blocage se produit dans le tube de trop - plein de la vanne d'admission, et l'aiguille d'injection ne peut pas être poussée lorsque l'échantillon est injecté à l'intérieur de la vanne d'admission. Cette défaillance est due au blocage du tube de trop - plein. Le colmatage est dû en grande partie au fait que la phase mobile de l'échantillon dissous est une solution saline dont le sel cristallise à l'orifice de vidange du tube de trop - plein. À ce stade, un petit bécher peut contenir une petite quantité d'eau distillée sur le tuyau de trop - plein légèrement trempé, la cristallisation du sel au port peut être dissoute, dépannage. Cette défaillance peut être évitée si, après la fin de chaque prélèvement, la totalité des sels rincés à plusieurs reprises à l'eau distillée dans le tube de trop - plein est évacuée.

Problèmes avec la phase mobile

Le méthanol et l'acétonitrile sont souvent utilisés pour formuler la phase mobile par chromatographie liquide. Les réactifs couramment utilisés en chromatographie liquide sont des réactifs de haute qualité tels que les réactifs chromatographiquement purs. Des réactifs préférentiellement purs ou même analytiquement purs peuvent également être utilisés lorsque les exigences ne sont pas trop strictes. Les détecteurs UV sont couramment utilisés dans l'analyse par chromatographie liquide, de sorte que la réduction du bruit de base et l'amélioration de la sensibilité analytique doivent être considérées comme des réactifs chromatographiquement purs avec une faible absorption UV et une faible teneur en impuretés.

1, filtration de la phase mobile. La phase mobile bien formulée doit être filtrée avec une membrane filtrante microporeuse de 0,5 µm de diamètre de pore avant utilisation. C'est parce que la solution contient beaucoup de minuscules particules difficiles à détecter à l'œil nu, si elles ne sont pas filtrées, le filtre sur l'orifice de la pompe, la tête de colonne sera obstrué, de sorte que le passage normal de la phase mobile est obstrué, de sorte que la résistance de la colonne de chromatographie augmente, la pression de la colonne augmente, l'effet de la colonne diminue. Lorsque cela se produit, remplacez la phase mobile filtrée et retirez le filtre bouché et Trempez - le dans une solution aqueuse d'acide nitrique à 20% pour le nettoyer à ultrasons pendant 20 minutes afin d'éliminer les bouchons sur le filtre.

2, dégazage de la phase mobile. La phase mobile doit être dégazée avant utilisation pour éliminer autant que possible les gaz dissous dans la phase mobile qui, sinon, dégraderaient les performances du remplissage de la colonne et pourraient également perturber fortement le signal du détecteur. Il existe de nombreuses méthodes de dégazage, telles que le dégazage par ultrasons, le dégazage sous vide, le dégazage à l'azote, etc. La méthode de dégazage sous vide et la méthode de dégazage à flux d'azote sont les méthodes de dégazage couramment utilisées à l'heure actuelle. L'eau et le méthanol mélangés créent un grand nombre de bulles qui, si elles sont utilisées sans dégazage, pénètrent dans la colonne de chromatographie et le détecteur et affecteront le déroulement normal du travail d'analyse.

Iv. Utilisation et entretien des colonnes de chromatographie

La colonne de chromatographie est le composant principal du chromatographe en phase liquide Zui, si la substance testée peut être bien séparée et déterminée, la performance de la colonne de chromatographie joue un rôle décisif. Par conséquent, dans le travail quotidien, une attention particulière doit être accordée à l'utilisation correcte de la colonne de chromatographie et à l'entretien de la réparation afin de prolonger la durée de vie de la colonne.

1, utilisez les colonnes de pré - et de protection. Une pré - colonne (pré - colonne) est montée entre la pompe et l'échantillonneur, elle donne un équilibre * à la phase mobile dans la colonne de chromatographie et empêche l'entrée dans la colonne de composants ou de contaminants ayant un effet destructeur sur le remplissage de la colonne. La colonne de protection (colonne de garde) peut bloquer l'entrée des composants capables de s'adsorber fermement sur la colonne de chromatographie, la colonne de protection doit être identique à la charge de la colonne de chromatographie. La précolonne et la colonne de protection peuvent être changées fréquemment sans qu'il soit nécessaire de changer fréquemment la colonne chromatographique, ce qui prolonge la durée de vie de la colonne chromatographique.

2, empêcher le gaz d'entrer dans la colonne de chromatographie. Certaines colonnes de chromatographie, telles que les colonnes de gel, ne permettent pas l'entrée de bulles d'air, sinon cela réduira l'efficacité de la colonne ou même formera de minuscules chambres à gaz difficiles à évacuer. Par conséquent, pour éviter que les bulles d'air ne pénètrent dans la colonne de chromatographie, il est nécessaire d'utiliser une phase mobile dégazée et de suivre strictement les étapes ci - dessous pour installer la colonne de chromatographie. A. démonter la vis d'étanchéité à l'entrée de la colonne de chromatographie inférieure pour voir si le solvant suinte; B. Si le solvant suinte, la colonne de chromatographie peut être fixée à la ligne pour éviter l'entrée de bulles; C. Si aucun solvant ne suinte, cela indique que cette extrémité de la colonne de chromatographie est entrée dans l'air, à ce stade, la sortie de la colonne de chromatographie peut être connectée à la vanne d'admission pour rincer la colonne de chromatographie dans le sens inverse avec une phase mobile afin d'éliminer l'air à l'intérieur de la colonne. Rincer la colonne de chromatographie avec un faible débit de 0,2 ml / min, si le débit de solvant est trop rapide ou si la pression augmente soudainement, les performances de la colonne seront réduites; D. si le solvant sortant ne contient pas de bulles d'air, cela signifie que le gaz à l'intérieur de la colonne a été expulsé et que la colonne de chromatographie est à nouveau alignée dans la bonne direction, de sorte que les bulles d'air ne peuvent pas entrer dans la colonne de chromatographie.

3, nettoyage de la colonne de chromatographie. Afin de ne pas laisser la substance testée et les impuretés rester dans la colonne de chromatographie, la colonne doit être lavée à temps après la fin de chaque travail d'analyse de l'échantillon. La colonne de chromatographie doit d'abord être éluée avec un solvant ayant une forte capacité d'élution pour l'échantillon testé, à titre d'exemple, la méthode de chromatographie en phase inverse couramment utilisée dans le travail d'analyse, car la substance qui en sort en premier est une substance très polaire, à ce stade, l'application de méthanol à 100% ou l'utilisation d'un solvant légèrement moins polaire comme l'isopropylène pur, le Tétrahydrofurane et d'autres éluants adsorbés à l'intérieur de la colonne avec une substance moins polaire, la quantité d'éluant est généralement de 20 fois Si la phase mobile est une solution tampon, la colonne de chromatographie doit être rincée d'abord avec de l'eau distillée pour éliminer les sels à l'intérieur de la colonne, puis avec un solvant approprié.

La colonne de gel utilisée dans la chromatographie de gel - filtration est généralement une solution tampon pour la phase mobile, qui est bien sûr rincée avec de l'eau distillée après utilisation. S'il s'agit d'un fonctionnement continu, la solution tampon peut être placée à l'intérieur de la colonne pendant la nuit, mais un faible débit (< 0,5 ml / min) est maintenu pour éviter le dégagement de sels tampons et si la phase mobile contient des halogénures, même pendant la nuit, il est nécessaire de rincer La colonne chromatographique à l'eau distillée pour éviter leur corrosion du corps de colonne.

4, dépôt de la colonne de chromatographie. Si la colonne de chromatographie n'est pas utilisée temporairement, faites attention aux points suivants lors du stockage:

A. pour un placement à court terme dans quelques jours, la colonne chromatographique doit être rincée avec un solvant (par exemple, la colonne de gel est rincée avec de l'eau distillée), puis les deux têtes de la colonne chromatographique sont bien scellées avec des vis d'étanchéité.

B. Si la colonne de chromatographie n'est pas utilisée pendant une longue période, le traitement par la seule méthode ci - dessus ne fonctionnera pas, alors vous devez utiliser la colonne de chromatographie en utilisant le solvant indiqué dans les instructions pour remplir la colonne de chromatographie, la colonne de phase inverse utilise généralement du méthanol, la colonne de Phase normale peut utiliser du N - butane ou de l'heptane, tandis que la colonne de gel ne peut pas utiliser d'eau, car la croissance de micro - organismes dans la colonne réduira l'efficacité de la colonne, à ce stade, une solution aqueuse de Nan à 0,05% (conservateur) est appliquée pour rincer la colonne de chromatographie, puis sceller la colonne. Lorsque la colonne de chromatographie est placée pendant une longue période, assurez - vous de sceller fermement les deux extrémités de la colonne de chromatographie afin d'éviter le phénomène de rétrécissement à sec du remplissage de la colonne dû à la volatilisation du solvant, car cela peut entraîner une réduction sévère de l'efficacité de la colonne.

C. la colonne de chromatographie doit être conservée à température ambiante, si elle est placée dans un environnement inférieur à 0 ° C, elle gèlera, ce qui entraînera également une diminution de l'efficacité de la colonne.

V. problème bimodal des pics chromatographiques

Après une longue période d'utilisation de la colonne de chromatographie, si des impuretés entrent, la phase stationnaire à l'entrée de la colonne de chromatographie "plaque" et sous l'effet de la pression élevée créée par la phase mobile, forme un effondrement de la tête de colonne, le pic chromatographique normal de la composante de l'échantillon analysé devient un double PIC, lorsque la colonne de chromatographie peut être réparée comme décrit ci - dessous. Tout d'abord, tournez l'écrou de fixation de la tête de colonne, puis vous verrez que la phase fixe à l'intérieur de la tête de colonne a été comprimé à l'intérieur et peut être rétracté de plus de 10 mm dans les cas graves. Dans ce cas, nous pouvons utiliser la pointe de l'aiguille pour couper la partie jaunâtre de la jonction de la plaque de surface de la phase mobile et dans la même phase fixe pour remplir cette zone d'effondrement, compacter, puis serrer la vis de fixation de la colonne de chromatographie, le travail de réparation est terminé. Lorsque l'échantillon est refait avec la colonne chromatographique réparée, le pic chromatographique revient à la normale.

Ce qui précède décrit l'utilisation correcte du chromatographe et les méthodes de dépannage de plusieurs façons. Dans le travail quotidien, si vous pouvez prendre ces questions au sérieux et résoudre les problèmes à temps, cela prolongera considérablement la durée normale d'utilisation de l'instrument et permettra aux performances de l'instrument d'être maximisées.