La gestion et l'utilisation du milieu promocell est l'une des clés du succès des expériences de culture cellulaire, impliquant de multiples liens tels que le stockage, la formulation, la manipulation aseptique, l'entretien quotidien et plus encore. Voici les spécifications détaillées et les considérations:
I. Gestion du stockage du milieu promocell
1. Contrôle de la température
Lorsqu'il n'est pas ouvert: conserver au réfrigérateur 2 ℃ ~ 8 ℃ (réfrigéré) selon les exigences des instructions, éviter la congélation conduisant à la dénaturation des ingrédients ou à la précipitation. Une partie du milieu spécial peut nécessiter une conservation à l'abri de la lumière (p. ex. avec du sérum ou des additifs photosensibles).
Après ouverture: l'embouchure de la bouteille pour une utilisation à court terme doit être désinfectée par un essuyage à 75% d'alcool et remise au réfrigérateur dès que possible; Les milieux restants qui ne sont pas utilisés depuis longtemps doivent être marqués avec la date d'ouverture, en donnant la préférence aux anciens lots pour réduire les risques de dégradation.
Remarque: La congélation et la fonte répétées perturbent l'activité du facteur de croissance, il est strictement interdit de décongeler plusieurs fois après le fractionnement du grand emballage! Il est recommandé d'emballer en petits tubes pour la Cryoconservation (- 20 ° c) selon les besoins expérimentaux, en utilisant la fonte unidirectionnelle pour l'utilisation.
2. Surveillance de la période de validité
Les délais de validité indiqués sur l'emballage sont strictement respectés et les produits périmés ne peuvent plus être utilisés même s'ils ne sont pas épuisés. Si une couleur anormale, une turbidité ou une précipitation accrue sont détectées, le traitement de mise au rebut précoce.
Pour les milieux auxquels des antibiotiques ont été ajoutés (p. ex., pénicilline / streptomycine), il est plus important de se concentrer sur la date d'expiration, car la puissance des antibiotiques diminue avec le temps.
3. Mesures anti - pollution
La zone de stockage est dédiée au stockage du milieu de culture, loin des contaminants tels que les produits chimiques volatils, les acides forts et les bases fortes. Les différents types de milieux de culture sont placés séparément pour éviter toute confusion croisée.
Nettoyez régulièrement votre réfrigérateur, jetez les contenants abandonnés et désinfectez les étagères pour éviter que la moisissure ne contamine les stocks.
II. Préparation du milieu promocell avant utilisation
1. Préchauffage et équilibrage
Après avoir été retiré du réfrigérateur, laisser chauffer à température ambiante jusqu'à environ 37 °C (pour les cellules de mammifères), ou ajuster à la température appropriée en fonction du type de cellule cible. Peut être chauffé directement au bain - Marie, mais évite la formation de bulles par des chocs violents.
Mélanger délicatement plusieurs fois à l'envers avant utilisation, en assurant une distribution homogène des additifs (en particulier les milieux contenant du sérum ou du bicarbonate de sodium sont facilement délaminables).
2. Ingrédients supplémentaires ajoutés
Sérum / FBS: le sérum de veau foetal doit être inactivé dans la proportion requise (généralement 5% ~ 20%), en notant que les différences de performance entre les différents sérums de numéro de lot peuvent affecter la cohérence des résultats expérimentaux.
Solution bi - anti: si le milieu de base ne contient pas d'antibiotiques, ajouter 1 ml de mélange de pénicilline par 100 ml (concentration finale d'environ 100 u / ML).
Autres facteurs: les composants instables tels que la Glutamine, le Pyruvate de sodium, etc. doivent être adaptés avant l'utilisation provisoire pour éviter une exposition prolongée à l'échec.
3. Vérification de l'étalonnage du pH
Détectez si l'acidité et l'alcalinité ajustées correspondent à la plage cible avec un pH - mètre de précision. Le système tampon à l'intérieur de l'incubateur de co peut être naturellement équilibré ou ajusté par des gouttes de NaOH / HCl.
Test de comparaison de l'ancien et du nouveau milieu: l'observation du changement de couleur de l'indicateur détermine si un ajustement supplémentaire est nécessaire.
Iii. Spécifications de fonctionnement aseptique du milieu promocell
1. Travail à l'intérieur de l'armoire de biosécurité
Toutes les opérations impliquant l'ouverture de l'embouchure de la bouteille doivent être effectuées dans un banc ultra - net à flux laminaire, comprenant des étapes telles que l'inversion, le pipetage, le mélange, etc. Irradiation UV pendant 30 minutes avant l'opération et mise en marche du ventilateur pendant au moins 5 minutes pour dissiper les résidus d'ozone.
Porter un équipement de protection individuelle approprié (vêtements de laboratoire, gants, masques) et réduire le risque d'introduction humaine de contamination.
2. Évitez la contamination microbienne
Il est strictement interdit de toucher directement l'intérieur de l'embouchure de la bouteille avec les mains, incliner le corps de la bouteille lors du déversement pour permettre au liquide de couler le long de la paroi et éviter de verser verticalement pour créer des éclaboussures. La pointe de la paille * ne doit pas entrer en contact avec la partie inutilisée du liquide dans le flacon.
Serrez le bouchon immédiatement après chaque prélèvement et repositionnez - vous après avoir nettoyé la surface extérieure avec de l'alcool à 70%. Le milieu suspecté de contamination doit être traité immédiatement par autoclavage.
3. Nécessité de la filtration et de l'élimination des bactéries
Dans le cas d'un milieu maison ou d'un complément d'ingrédients frais, il doit être utilisé après filtration bactéricide par membrane filtrante de 0,22 µm. Les milieux prémélangés disponibles dans le commerce ont généralement été stérilisés, mais il est toujours recommandé de faire des tests de stérilité lors d'une seule utilisation (par exemple, la méthode de la plaque enduite pour confirmer la croissance sans impuretés).