I. Introduction au contexte

La flore intestinale est nombreuse et complexe dans sa composition, la composition et les changements physiologiques du microbiote intestinal humain sont liés à de nombreuses maladies, et l'étude des microbes intestinaux permet de mieux comprendre leur relation avec la santé humaine, pour laquelle le travail d'isolement et de culture de la flore intestinale est actuellement essentiel.

Le mode traditionnel de culture d'isolement de la flore intestinale est dominé par le mode de la plaque, en raison de la grande charge de travail, le mode de culture de la plaque a des problèmes de consommation de temps, d'inefficacité et souvent de mauvais résultats de culture.Technologie microfluidique de gouttelettesL'utilisation dans la culture d'isolement de la flore intestinale est de plus en plus rapportée par la monodispersion de la flore intestinale dans des gouttelettes individuelles indépendantes, fournissant un espace liquide confiné et indépendant pour la croissance des souches individuelles, favorisant grandement la croissance microbienne, évitant que les souches vulnérables ne soient couvertes par des souches dominantes, améliorant Ainsi le type et le nombre de micro - organismes cultivables.

Cette expérience crée automatiquement des dizaines de milliers d'unités de culture de gouttelettes individuelles à l'aide de l'instrument cell Miss de tianju bio, dispersant les microbes dans chaque gouttelette pour une culture indépendante dans laquelle les individus de différentes espèces de bactéries peuvent se développer et proliférer pleinement, tout en éliminant les effets de la croissance excessive et de La croissance rapide des populations dans les cultures communautaires.La méthode de culture basée sur le dispositif Miss cell surmonte considérablement les défauts de la culture traditionnelle en plaques et fournit une plate - forme de recherche importante pour l'identification et la découverte de taxons rares de bactéries symbiotiques intestinales et de flore environnementale anaérobie.

II. Processus expérimental de culture isolée de la flore intestinale à base de plaques et d'appareils Miss Cell

1. Prétraitement de l'échantillon, déterminer la concentration supérieure

Après la collecte de l'échantillon fécal pour dilution, comptez à l'aide d'une plaque de comptage des globules, diluez la concentration de l'échantillon à 10 000 - 30 000 UFC / ML avec du milieu de culture, le flux de travail est le suivant:

2. Culture isolée de la flore intestinale en milieu anaérobie par un appareil cellulaire Miss

Cette expérience a généré un total d'environ 20 000 gouttelettes, qui ont été détectées et triées après une culture anaérobie de 30 jours à 37 ° C, et après 5 heures de tri, un total d'environ 4 600 gouttelettes contenant des bactéries et un séquençage à haut débit, le flux de travail est illustré ci - dessous:

3. La flore intestinale est cultivée à l'aide de plaques isolées

Cette expérience a été enduite d'un total de 15 plaques, recueillies après 30 jours de culture anaérobie à 37 ° C et séquencées à haut débit, le flux de travail est illustré dans le diagramme ci - dessous:

4 résultats expérimentaux

(1) les cultures isolées à l'aide d'un appareil cellulaire Miss ont permis d'identifier 10,9% (13 / 119) des espèces bactériennes supplémentaires (au niveau du genre) par rapport au Groupe de matières fécales brutes non cultivées, ce qui est significativement supérieur à 0,8% (1 / 119) des plaques.

(2) la culture en gouttelettes améliore la richesse en espèces de 40% (au niveau du genre) par rapport à la culture en plaques et a un meilleur effet d'enrichissement pour Bifidobacterium, peptoniphilus, collinsella, phascolarctobacterium, Enterococcus, Porphyromonas, etc.

Iii. Tianju bio Miss cell instrument fournit des solutions automatisées à haut débit et efficaces pour les processus d'isolement, de culture et de criblage des bactéries anaérobies strictes telles que la flore intestinale

Dans cette étude, en utilisant l'instrument Tissue bio Miss Cell, un total de 20 000 gouttelettes ont été générées et le tri a donné environ 4 600 gouttelettes monoclonales, permettant la culture automatisée et le tri de la flore intestinale, tout en évitant les problèmes de croissance compétitive et de contamination croisée entre les souches, en fonction des avantages de la culture de gouttelettes, améliorant considérablement la richesse des souches enrichies après la culture.

Miss cell réalise un processus complet d'expérimentation de la flore intestinale à haut débit, des opérations automatisées, améliore considérablement la capacité de culture microbienne, réduit considérablement la charge de travail du personnel d'expérimentation, améliore l'efficacité du travail, fournit une plate - forme expérimentale automatisée efficace pour la culture monoclonale et le criblage à haut débit, fournit un soutien puissant pour la culture et le criblage des souches!