I. actinomycètes

Actinomycetes, un groupe procaryote très répandu dans la nature, est une ressource microbienne extrêmement importante, étroitement liée à la production et à la vie humaines, qui se distingue par sa capacité à produire une grande variété d'antibiotiques. Actinomycètes peuvent former des mycéles ramifiés et conidies, se développer sous forme de filaments bactériens, se reproduire principalement par la formation de spores asexuées, et peuvent également se reproduire par des fragments de division bactérienne. Actinomycètes se développent à un certain stade, une partie des mycélium aérophytes forment des filaments de spores, qui mûrissent et se différencient en de nombreuses spores, appelées conidies.

Figure 1 schéma des actinomycètes

Figure 2 mycélium aerogenes et sporofilum d'actinomycètes

Étant donné que les spores, en raison de leurs caractéristiques telles que leur petite taille, leur masse légère et leur dispersion facile, sont extrêmement susceptibles de causer des problèmes de contamination croisée entre différentes colonies monoclonales sur la même plaque solide, ce qui pose un grand défi à la culture et à l'isolement des actinomycètes.

Le système de microculture de gouttelettes à haut débit Miss cell peut envelopper les cellules (spores) dans les gouttelettes, former des unités de culture indépendantes et éviter la dispersion de mycélium ou de spores dans d'autres monoclones de gouttelettes, surmontant ainsi les problèmes de contamination croisée entre les souches et améliorant l'efficacité et la pureté des monoclones actinomycètes obtenus. Cette expérience fournit une méthode de culture isolée pour la culture isolée de filaments non sporogènes, basée sur l'isolement et la culture d'actinomycètes réalisés à partir de mycélium.

II. Isolement des actinomycètes cultivés à l'aide de cellules Miss

1. Prétraitement de l'échantillon, déterminer la concentration supérieure

On recueille le mycélium actinomycètes (30°C, 4 jours de culture), on ajoute du mycélium fracassé de la souche de verre, on le dénombre à travers des plaques de comptage de globules, on dilue la concentration de l'échantillon à 500 - 1000 UFC / ML avec du milieu de culture BM et on procède comme suit:

Figure 3 processus de traitement des échantillons

2.miss cell culture isolée

Cette expérience a généré un total de 2500 gouttelettes qui ont été détectées et triées après 96 H de culture, et après 60 minutes de tri, un total d'environ 500 gouttelettes contenant des bactéries, le flux de travail de l'instrument Miss Cell est illustré ci - dessous.

Figure 4 Flux de travail Miss Cell

3 résultats expérimentaux

1) Comparaison des taux de croissance:Différents points de temps pour observer la croissance d'actinomycètes en gouttelettes et en plaques, la croissance apparaît dans les gouttelettes après 1 jour de culture de gouttelettes, la croissance du mycélium après 6 jours de culture de plaques, le taux de croissance d'actinomycètes de culture de gouttelettes est significativement meilleur que la culture de plaques, le meilleur temps de tri de culture d'actinomycètes est de 4 jours.

Figure 5 croissance des actinomycètes sur plaque solide

Figure 6 croissance des actinomycètes en gouttelettes

2) diagramme des résultats du tri des gouttelettes actinomycètes

Figure 7 culture d'actinomycètes pendant 4 jours, situation de tri en mode OD

Figure 8 culture d'actinomycètes pendant 4 jours, situation de tri en mode fluorescent

Iii. Tianju bio Miss cell instrument fournit des solutions automatisées à haut débit et efficaces pour les processus d'isolement, de culture et de criblage des actinomycètes

Dans cette étude, l'instrument Miss cell de skywood bio a été utilisé pour générer un total de 2500 gouttelettes et le tri a donné environ 500 colonies uniques, permettant une culture et un tri automatisés d'actinomycètes, évitant efficacement la contamination croisée entre les souches. Dans le même temps, une méthode de culture isolée est également proposée pour les bactéries filamenteuses qui ne produisent pas de spores. Cette expérience consomme un total de 8 ml de milieu de culture et automatise la génération de gouttelettes, la culture et le criblage dans des plaques de 96 puits, améliorant considérablement l'efficacité de l'acquisition monoclonale tout en évitant efficacement les problèmes de contamination croisée, fournissant une plate - forme d'outils efficace pour le criblage monoclonal d'actinomycètes.

L'instrument cell Miss de tianju bio fournit une plate - forme expérimentale automatisée efficace pour la culture monoclonale et le criblage à haut débit pour les bactéries comprenant actinomycètes dans les spores incluses, offrant un soutien puissant pour la culture et le criblage des souches!