1 Champ d'application: Cette norme spécifie les conditions et les méthodes d'essai des bactéries planctoniques dans les salles stériles et les zones propres de l'industrie pharmaceutique.

La présente norme s'applique à l'essai et à la vérification de l'environnement pour les bactéries planctoniques dans les salles stériles et les zones propres de l'industrie pharmaceutique, les salles stériles ou les zones de purification d'air locales, y compris les bancs de travail propres.

2 référence standard: GB / t 16293? 2010

Addenda au Code de gestion de la fabrication des médicaments (révisé en 1998).

3 normes

Pureté	Nombre de micro - organismes vivants / m3
Niveau 100	5
10 000 niveaux	100
100 000 niveaux	500

4 Méthode d'essai

4.1 Résumé de la méthode

La méthode utilisée pour ce spécimen est la méthode de concentration par comptage. C'est - à - dire en recueillant les particules biologiques en suspension dans l'air dans un milieu spécialisé (en sélectionnant un milieu qui confirme qu'il peut soutenir la croissance microbienne), en les laissant se multiplier jusqu'à un dénombrement visible des colonies à plusieurs moments et dans des conditions de croissance appropriées pour déterminer la concentration microbienne dans ce compartiment.

4.2 Responsabilités et formation du personnel

Les testeurs de chambres stériles doivent suivre cette formation et obtenir les qualifications appropriées avant de pouvoir effectuer des tests de chambres stériles contenant les connaissances en matière d'hygiène et les connaissances microbiologiques de base.

Le testeur de la salle stérile doit choisir un mode de port adapté aux exigences de pureté de l'air pour les opérations de production, les vêtements extérieurs ne pouvant pas être apportés dans des zones de classe supérieure à 100 000.

4.3 instruments, appareils auxiliaires et milieux de culture

Choisir un échantillonneur de phytoplancton approprié, y compris l'utilisation d'une pompe d'extraction sans huile, un débit d'air plus faible et un débit d'échantillonnage plus important pour garantir que la distribution d'eau à la surface du milieu de culture est séchée par soufflage.

Ce test nécessite la présence d'instruments, d'équipements auxiliaires et de milieux de culture comme suit:

A) échantillonneurs de bactéries planctoniques;

B) boîtes de pétri;

C) pot de désinfection haute pression;

D) milieu de culture;

E) incubateur thermostatique;

4.4 principe de l'échantillonneur de bactéries planctoniques

Les échantillonneurs de zooplancton utilisent généralement le mécanisme de la méthode d'impact, qui peut être divisé en échantillonneurs de type sandwich, centrifuges ou à trou d'épingle. L'échantillonneur à couture est aspiré par un ventilateur interne dans un flux d'air qui, à travers la plaque plate à couture de l'échantillonneur, pulvérise l'air d'acquisition et frappe la surface du milieu de culture plat lent, où les particules microbiennes vivantes attachées forment des colonies après culture. Échantillonneur centrifuge en raison de la rotation à grande vitesse du ventilateur interne, le flux d'air sort de l'avant vers l'arrière de l'échantillonneur, sous l'effet de la force centrifuge, les particules microbiennes vivantes dans l'air ont suffisamment de temps pour frapper la bande de culture solide, les particules microbiennes vivantes attachées forment des colonies Après culture. Un échantillonneur de type sténopé est un flux d'air aspiré à travers un couvercle métallique qui est densément usiné de petits trous spécialement conçus pour frapper l'air finement recueilli directement sur la surface du milieu de culture plat à travers un ventilateur, et les particules microbiennes vivantes attachées sont cultivées pour former des colonies.

4.5 points de test

4.5.1 l'instrument d'essai doit être vérifié périodiquement conformément au cycle de vérification de l'instrument. La vérification doit être effectuée avec la conformité et l'instrument doit être utilisé pendant la période de validité.

4.5.2 si l'instrument d'essai ne pénètre pas dans la zone d'essai, laver la surface au besoin ou préparer et entreposer l'instrument dans la pièce stérile appropriée (protéger l'instrument avec une housse de protection ou un autre revêtement extérieur approprié).

4.5.3 lors de l'utilisation de papier à l'intérieur stérile de la classe 100, le dessus doit être recouvert d'un revêtement transparent et exempt de poussière, et la gomme du crayon ne doit pas être utilisée à l'intérieur stérile de la classe 100.

4.5.4 les instruments d'essai doivent être utilisés en stricte conformité avec les instructions.

4.5.4.1 l'instrument est allumé, après avoir été préchauffé à stable, il peut être corrigé comme indiqué dans les instructions, tout en vérifiant le débit d'échantillonnage et en réglant le temps en fonction de la quantité d'échantillon.

4.5.4.2 les orifices d'échantillonnage doivent être fabriqués à l'aide de matériaux faciles à désinfecter et chimiquement stables.

4.5.4.3 les fuites sont strictement interdites dans les tubes d'échantillonnage et les parois intérieures doivent être lisses.

4.5.4.4 la longueur du tube de prélèvement doit être déterminée en fonction de la hauteur du point de mesure, en minimisant la flexion.

4.6 boîtes de pétri

4.6.1 les boîtes de pétri de calibre φ90mm × 15mm sont généralement utilisées. La boîte de pétri appropriée peut être choisie en fonction de l'échantillonneur choisi.

4.6.2 bandes de culture solides pour échantillonneurs centrifuges

4.7 milieu de culture

Milieu gélosé à la caséine de soja (TSA) ou milieu sableux (SDA) ou autre milieu reconnu et validé par l'utilisateur.

4.8 incubateurs thermostatiques

L'efficacité de l'incubateur thermostatique doit être vérifiée régulièrement

4.9 Étapes d'essai;

4.9.1 l'instrument, la surface de la boîte de pétri avant l'essai doivent être rigoureusement désinfectés.

4.9.1.1 Échantillonneurs stérilisés au moyen d'un désinfectant dans une pièce désinfectée avant d'entrer dans la pièce à l'essai Échantillonneurs pour salles stériles de classe 100

Il convient de le placer à l'avance dans la pièce à tester.

4.9.1.2 nettoyer la surface extérieure de la boîte de pétri avec un désinfectant.

4.9.1.3 avant l'échantillonnage, désinfecter le couvercle supérieur de l'échantillonneur, le Carrousel et l'intérieur et l'extérieur du capot avec un désinfectant, puis pulvériser doucement la paroi intérieure et le Carrousel du capot avec un désinfectant.

4.9.1.4 les orifices de prélèvement et les tubes de prélèvement doivent être stérilisés à haute température avant utilisation. Si les parois externes et internes du tube sont désinfectées avec un désinfectant, le liquide résiduel dans le tube doit être versé et séché.

4.9.1.5 l'échantillonneur doit porter un vêtement de travail correspondant à la zone propre à l'essai, désinfecter les mains avec un désinfectant ou utiliser des gants stériles avant de placer ou de changer la boîte de pétri sur le Carrousel.

4.9.1.6 ne pas mettre dans la boîte de pétri après la désinfection de l'instrument d'échantillonnage, allumer l'échantillonneur de phytoplancton pour que le désinfectant résiduel dans l'instrument s'évapore pendant au moins 5 minutes, vérifier le débit et ajuster le temps de réglage en fonction de la quantité d'échantillon.

4.9.1.7 fermer l'échantillonneur flottant, placer dans la boîte de pétri et couvrir.

4.9.1.8 après avoir placé l'orifice d'échantillonnage au point d'échantillonnage, allumer l'échantillonneur de bactéries planctoniques pour l'échantillonnage.

4.10 Culture

4.10.1 une fois tous les échantillons terminés, incuber les boîtes de pétri à l'envers dans un incubateur thermostaté.

4.10.2 après échantillonnage, incuber dans un incubateur de 30 °C à 35 °C pendant au moins 2 jours les incubateurs formulés avec du milieu de caséine de soja gélosé (TSA); après échantillonnage, incuber dans un incubateur de 20 °C à 25 °C pendant au moins 5 jours les incubateurs formulés avec du milieu de sable (SDA).

4.10.3 chaque lot de milieu de culture doit faire l'objet d'un essai de contrôle pour vérifier si la culture est essentiellement contaminée. 3 boîtes de pétri peuvent être sélectionnées par lot pour la culture témoin.

4.11 dénombrement des colonies

4.11.1 À l'œil nu, toutes les colonies sur la boîte de pétri ont été comptées directement, marquées ou comptées sur un compteur de colonies, puis examinées à l'aide d'une loupe de 5 à 10 fois pour détecter les omissions.

4.11.2 s'il y a 2 colonies ou plus superposées sur la plaque, on peut toujours compter 2 colonies ou plus au moment de la Division.

4.12 précautions

4.12.1 la qualité de chaque boîte de pétri doit être soigneusement vérifiée avant utilisation, le milieu et la boîte de pétri étant endommagés, cassés ou contaminés.

4.12.2 consigner en détail le milieu de culture, les conditions de culture et d'autres paramètres.

4.12.3 en raison de la grande variété de bactéries, la différence est très grande, le comptage est généralement soigneusement observé avec la lumière transmise sur la surface de la boîte de pétri ou sur le vrai visage, ne manquez pas de mesurer la croissance des colonies sur les bords de la boîte de pétri, et il est nécessaire de distinguer Les colonies de bactéries ou les substances précipitées par le milieu, si nécessaire avec un microscope.

5 Règles de test

5.1 conditions d'essai

Avant le test, les paramètres relatifs à la chambre stérile doivent être testés au préalable, ce qui testera les conditions environnementales des particules en suspension, par exemple: ce test préalable peut inclure:

A) Essai de température et d'humidité relative. La température et l'humidité relative de la chambre stérile doivent être adaptées à ses exigences de production et de processus

Devrait (en l'absence d'exigences spéciales, le contrôle de la température à 18 ℃ ~ 26 ℃, le contrôle de l'humidité relative entre 45% et 65% est approprié). Plein en même temps

La portée de l'utilisation de l'instrument d'essai du pied;

B) un essai de mesure du volume ou de la vitesse du vent dans la pièce ou un essai de la pression différentielle;

C) Essai de fuite du filtre

5.1 État des essais

Les deux états statique et dynamique peuvent être testés.

Pas plus de 2 testeurs en intérieur lors d'un test statique

Avant le test de zooplancton, la chambre stérile (zone) est déterminée par l'utilisateur à décider si la désinfection préalable est nécessaire.

Le Statut et le nombre de testeurs à l'intérieur de la salle utilisés pour l'essai doivent être indiqués lors de l'essai du zooplancton.

5.3 temps d'essai

5.3.1 dans le cas d'une chambre stérile à écoulement unidirectionnel, à vide ou statique a, l'essai doit commencer après au moins 10 min de fonctionnement normal du système de conditionnement d'air épuré. Pour les chambres stériles à écoulement non unidirectionnel, l'essai doit commencer après un temps de fonctionnement normal du système de purification d'au moins 30 minutes. Lors de l'essai statique B, le nettoyage du flux unidirectionnel est (zone), l'essai doit commencer après que les opérateurs de production ont évacué le site et se sont auto - nettoyés pendant 10 minutes; Pour les chambres stériles non unidirectionnelles, les essais doivent commencer après que les opérateurs de production ont évacué le site et se sont auto - nettoyés pendant 20 minutes.

5.3.2 lors de l'essai dynamique, l'heure à laquelle la production a commencé doit être enregistrée, ainsi que la durée de l'essai.

5.4 calcul de la concentration de bactéries planctoniques

5.4.1 nombre de points de prélèvement et leur disposition

5.4.1.1 nombre réduit de points d'échantillonnage

L'emplacement des points d'échantillonnage pour le zooplancton peut se référer à GB / t16292 - 2010

A) La position du point de mesure de la zone de travail est d'environ 0,8 à 1,5 m au - dessus du sol (légèrement au - dessus de la surface de travail).

B) La position du point de mesure de l'orifice d'alimentation en air est à environ 30 cm de la surface d'alimentation en air.

C) les points de mesure peuvent être ajoutés à l'équipement critique ou à la portée des activités de travail critiques.

5.4.2 petite quantité d'échantillonnage

Voir le tableau 1 pour chaque petit échantillon de zooplancton.

Tableau 1 petites quantités échantillonnées

Propre	Quantité d'échantillon L / fois
Niveau 100	1000
10 000 niveaux	500
100 000 niveaux	100
300 000 niveaux	100

5.4.3 nombre d'échantillons

Chaque point d'échantillonnage est généralement échantillonné une fois.

5.4.4 considérations relatives à l'échantillonnage

5.4.4.1 dans le cas d'une chambre stérile à écoulement unidirectionnel ou d'une prise d'air, l'orifice d'échantillonnage de l'échantillonneur doit être orienté dans la direction du flux d'air droit; Pour les chambres stériles à écoulement non unidirectionnel, l'orifice d'échantillonnage est orienté vers le haut.

5.4.4.2 lors de l'installation des points d'échantillonnage, il faut au minimum éviter autant que possible les évents de retour où les particules de poussière sont plus concentrées.

5.4.4.3 lors de l'échantillonnage, le testeur doit se tenir du côté du vent descendant de l'orifice d'échantillonnage et se déplacer le moins possible.

5.4.4.4 prendre toutes les mesures nécessaires pour prévenir la contamination du procédé d'échantillonnage et d'autres contaminations possibles des échantillons.

5.4.4.5 boîtes de pétri lorsqu'elles sont utilisées pour l'inspection, afin d'éviter les effets causés par le transport ou le déplacement des boîtes de pétri, il convient d'effectuer simultanément un essai de contrôle négatif en prenant une boîte de contrôle par zone ou par zone, en opérant de la même manière que la boîte de pétri, mais sans exposer la boîte de pétri, puis en la plaçant dans l'incubateur avec la boîte de pétri échantillonnée (TSA ou SDA), de sorte qu'elle ne croît pas stérilement.

5.5 enregistrement

Le rapport d'essai doit contenir ce qui suit:

A) le nom et l'adresse du testeur, la date du test;

B) base d'essai

C) La position plane de la chambre stérile d'essai (en indiquant la position plane de la zone adjacente si nécessaire);

D) Une description de l'instrument d'essai et de ses méthodes d'essai, y compris les conditions ambiantes d'essai, le nombre de points d'échantillonnage et les diagrammes d'agencement, le nombre d'essais, le débit d'échantillonnage ou les modifications éventuelles des méthodes d'essai, le certificat de vérification de l'instrument d'essai, etc.; Dans le cas d'un essai dynamique, le nombre et l'emplacement des opérateurs sur le site, le nombre et l'emplacement des équipements sur le site doivent également être enregistrés;

E) Résultats: toutes les données statistiques calculées sont incluses.

5.6 calcul des résultats

5.6.1 utilisez la méthode de comptage pour obtenir le nombre de colonies pour chaque boîte de pétri.

5.6.2 pour le calcul de la concentration moyenne de phytoplancton à chaque point de mesure, voir la formule (1).

Concentration moyenne (individus / m3) = nombre de colonies / quantité échantillonnée??????????????? (1)

Exemple 1: un point de mesure est échantillonné à 400 l et le nombre de colonies à 1, alors:

Concentration moyenne = 1 / 0,4 = 2,5 PCS / m3

Exemple 2: un point de mesure est échantillonné à 2 m3 et le nombre de colonies à 3, alors:

Concentration moyenne = 3 / 2 = 1,5 PCS / m3

5.7 Évaluation des résultats

5.7.1 la concentration moyenne de phytoplancton à chaque point de mesure doit être inférieure à la limite de la concentration bactérienne dans la norme d'évaluation choisie.

5.7.2 lors d'un essai statique, si la concentration moyenne de phytoplancton à un point d'essai dépasse les critères d'évaluation, le prélèvement d'échantillons doit être effectué deux fois et les résultats des deux essais doivent être jugés conformes.

5.8 surveillance quotidienne

Pour la surveillance du zooplancton, il convient de fixer des limites de correction et des limites d'alerte pour le flux d'air à la vitesse du vent sur un profil présentant des lignes d'écoulement parallèles dans une seule direction et perpendiculaires à la direction du flux d'air, afin de garantir le contrôle de la concentration microbienne dans la chambre stérile. La charge microbienne et l'efficacité des désinfectants doivent être vérifiées régulièrement, sans analyse de prédisposition. La surveillance statique et dynamique peut adopter cette approche.

En ce qui concerne la fréquence d'échantillonnage du zooplancton, il convient de considérer qu'il convient de modifier si:

---------------- dépassement continu des limites de correction et d'alerte;

---------------- l'arrêt de travail a été plus long que prévu;

------------- pendant la production, le système de purification de l'air effectue toute réparation majeure;

-------------------------------------------------------------------------

-------------------------------------------------------------------- changement de Protocole de désinfection;

--------------- contamination biologique, etc.;

--------------- lorsqu'il y a des réparations majeures ou des ajouts d'équipement à l'équipement de production;

----------------- lorsqu'il y a un changement important dans la distribution régionale de la structure de la chambre stérile.

Équipement Cie., Ltd de purification de Zhejiang suzingSitué dans la ville de daosu, district de Shangyu, ville de Shaoxing, Province du Zhejiang, il est l'un des fabricants de l'industrie des équipements de purification dans la région de l'est de la Chine. La norme iso14644 - 1, la norme nationale gb50073 - 2001 et le Code GMP national exigent la conception technique, la construction, l'inspection et les services techniques des systèmes de purification de l'air pour la microélectronique, la biomédecine, les salles d'opération hospitalières, les câbles à fibre optique, les aliments et les boissons, les Instruments de précision, les semi - conducteurs et les applications de nouveaux matériaux.
Série principale de table de purification de la société, série de cabine de douche à vent, série d'armoire de ventilation, série d'armoire de biosécuritéIl est largement utilisé dans les domaines de la santé et de la santé, de l'électronique, de la pharmacie, de la biologie, de l'alimentation, de l'agroforesterie, de l'élevage et de la médecine vétérinaire, de l'inspection et de la quarantaine, de l'aérospatiale, de la fabrication automobile, de l'instrumentation de précision, des collèges et universités et de divers instituts de recherche scientifique, jouissant d'une grande réputation sur le marché de l'
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