Kit de détection du virus de l'herpès félin

Kit de détection du virus de l'herpès félinSpécifications d'emballage 25T / box & 50T / box

[principe d'inspection]

Kit de détection du virus de l'herpès félinCe kit conçoit des amorces spécifiques et des sondes de balises moléculaires pour ce gène, la réaction de PCR étant réalisée et libérant un signal de fluorescence dans le cas où l'échantillon à examiner contient cet ADN. La surveillance en temps réel et la sortie des signaux de fluorescence correspondants dans le processus de PCR sont réalisées à l'aide d'instruments permettant une analyse qualitative des résultats de détection.

[conditions de stockage et date d'expiration] protégé de la lumière - moins de 20 ℃, éviter le gel et la dégel répétés, date d'expiration 12 mois.

série ABI, série bio - rad, Agilent Stratagene MX Series, roche lightcycler r480, cepheid smartcycler, rotor Gene Series, Hangzhou Bozhou Series et autres instruments PCR quantitatifs à fluorescence en temps réel multicanaux.

[demande d'échantillon]

1. Si testé avec des spécimens originaux. Les spécimens (liquide céphalo - rachidien du patient, sang veineux, liquide articulaire; Sang veineux d'animaux malades, lait; colonies, mycélium, etc.) doivent être des spécimens originaux fraîchement prélevés et mis en suspension à l'aide d'eau doublement stérilisée ou de saumure physiologique stérilisée.

2. Si un test PCR est nécessaire après la bactériophilisation, le spécimen original doit être bactériophilisé à l'aide d'un liquide bactériophilisant sélectif.

Si les échantillons ne peuvent pas être détectés immédiatement après la collecte, ils peuvent être placés à 2 ~ 8 ℃ au réfrigérateur pendant la nuit; Pour la conservation à long terme, les spécimens doivent être congelés à - 20 ℃ ~ - 80 ℃.

[méthode d'inspection]

1. Préparation des réactifs (zone de préparation des réactifs)

(1) Retirer le kit du réfrigérateur, retirer le réactif nécessaire à l'expérience du kit, bien fondre le mélange et centrifuger instantanément pour éliminer le liquide de fixation de la paroi du tube.

(2) Comptabiliser le nombre de réactions (n) nécessaires pour l'expérience et calculer les quantités des différents réactifs nécessaires pour l'expérience selon le système réactionnel présenté dans le tableau ci - dessous.

N = nombre de contrôles négatifs (1t) + nombre de contrôles positifs (1t) + réserve d'erreur (1t) + nombre d'échantillons

(3) Ajouter le réactif ci - dessus dans le tube de centrifugation stérile, bien mélanger après centrifugation instantanée. Les réactifs sont fractionnés dans le tube de réaction PCR selon une quantité de 20 µl / tube.

(4) transférer le tube de réaction PCR dans la zone de traitement des échantillons après avoir fermé le couvercle du tube de réaction PCR. Remettre les réactifs restants au réfrigérateur à une température inférieure à - 20 ° C pour les conserver congelés.

2. Préparation des échantillons (zone de traitement des échantillons)

Extraire les acides nucléiques avec le kit d'extraction ADN / ARN est correct, l'opération spécifique est effectuée conformément aux instructions de son Kit.

3. Échantillonnage

Dans le tube d'échantillon de réaction PCR préparé ci - dessus, ajouter l'ADN du spécimen à tester Traité de 5 μl chacun, volume final de 25 μl / tube, couvrir le couvercle de réaction PCR après malaxage et centrifugation instantanée à faible vitesse, transférer sur l'instrument PCR. Contrôle négatif et positif aux soins puis chacun plus 5 μl de kit pour apporter son propre contrôle négatif ou contrôle positif, le volume final est de 25 μl / tube, couvercle de la réaction PCR couvercle malaxé après centrifugation instantanée à faible vitesse, transféré à l'instrument PCR.

4. PCR (région amplifiée par PCR)

(1) prenez le tube de réaction PCR préparé pour la zone de traitement de l'échantillon, placez - le à l'emplacement approprié de la cuve d'échantillon du PCR quantitatif à fluorescence en temps réel et Notez l'ordre de placement.

(2) appuyez sur le tableau pour définir les paramètres relatifs à l'amplification des acides nucléiques de l'instrument pour l'amplification PCR.

Remarque: le PCR Fluorescent de la série ABI ne sélectionne pas la correction Rox lors du réglage, le Groupe de trempe de réglage sélectionne none.

[valeur de référence (plage de référence)]

1. Détermination de l'efficacité du kit:

(1) contrôle positif: il existe une courbe d'amplification type s typique ou une valeur CT ≤ 35.

(2) témoin négatif: valeur de CT & gt; 38 ou aucune valeur de CT, ligne droite ou légèrement oblique, sans période de croissance exponentielle.

2. Détermination des résultats des spécimens:

(1) positif: spécimen testé avec une valeur CT ≤ 35 ou avec une période de croissance exponentielle significative.

(2) suspect: le résultat du test de spécimen CT est compris entre 35 et 38. À ce stade, les échantillons doivent être testés à plusieurs reprises, si les résultats des expériences répétées CT valeurs sont encore dans la gamme 35 - 38, il y a une période de croissance exponentielle évidente, alors il est jugé positif, sinon négatif.

(3) négatif: spécimen testé avec une valeur de CT & gt; 38 ou sans valeur de CT.

[interprétation des résultats de l'inspection]

[Limites de la méthode d'inspection]

1. Des résultats faussement négatifs peuvent se produire lorsque la concentration d'acide nucléique dans l'échantillon testé est inférieure à la détection de ce kit.

Les échantillons testés sont manipulés de manière inappropriée lors de la collecte, du transport, du stockage et de la manipulation, ce qui peut entraîner une dégradation de l'ADN et produire des résultats faussement négatifs.

3. La contamination croisée de l'échantillon pendant la collecte, le transport, le stockage et le traitement, il est facile d'obtenir des résultats faussement positifs.

[indicateur de performance du produit] la limite de détection du produit est de 103 copies / ML et la valeur CV du produit est ≤ 3%.

[précautions]

1. Les laboratoires qui utilisent ce kit doivent être gérés en stricte conformité avec les normes de gestion des laboratoires de test d'amplification génétique publiées par les parties concernées du pays;

2. Pour éviter la dégradation de l'ARN, le processus de traitement de l'échantillon doit fonctionner à 0 - 4 ℃, et immédiatement après l'achèvement de l'expérience pour la détection; Les consommables de l'appareil utilisés lors du traitement des échantillons doivent être traités sans ribozyme;

3. Les articles de chaque zone sont dédiés et ne doivent pas être croisés pour éviter la contamination; La table de travail doit être nettoyée immédiatement après la fin de la détection;

4. Lors de l'aspiration du liquide réactionnel, essayez d'éviter la formation de bulles d'air; Avant de monter l'appareil PCR, il faut faire attention à vérifier que chaque tube de réaction est bien fermé, afin de ne pas provoquer d'inexactitude dans les résultats de l'évaporation du liquide;

5. Kit tous les réactifs doivent être bien fondus et mélangés à la température normale avant utilisation et doivent être centrifugés instantanément;

6. Les témoins négatifs et positifs contenus dans le kit doivent tous être transférés dans la zone de préparation des spécimens et entreposés séparément avant la première utilisation;

7. Pour éviter les interférences de fluorescence, le contact direct avec le tube de réaction PCR doit être évité avec les mains nues et tout Marquage sur le tube de réaction PCR doit être évité;

8. La tête d'aspiration utilisée dans le processus d'essai doit être frappée directement dans le cylindre de déchets contenant 10% d'acide hypochloreux, le tube de réaction PCR à la fin de l'essai, couper le couvercle et le jeter avec d'autres articles abandonnés après stérilisation; Les bancs de travail et les diverses fournitures expérimentales doivent être régulièrement désinfectés avec de l'acide hypochloreux à 10%, de l'alcool à 75% ou des lampes UV;

Les paramètres relatifs à l'amplification instrumentale doivent être fixés conformément aux exigences pertinentes de la présente description; Les réactifs de numéros de lot différents ne peuvent pas être mélangés; Et utiliser pendant la période de validité. Les produits sont destinés uniquement à la recherche scientifique.