Grand Kit QPCR pour la méthode de la sonde amicéli (sans Ginseng interne)

Grand Kit QPCR pour la méthode de la sonde amicéli (sans Ginseng interne)

Kit de PCR en temps réel Ammi majus L. Probe (sans contrôle interne)

Grand Kit QPCR pour la méthode de la sonde amicéli (sans Ginseng interne)Produits et caractéristiques:
Basé sur la technique de PCR quantitative par fluorescence en temps réel par la méthode de sonde Taqman. Des amorces spécifiques et des sondes fluorescentes Taqman ont été conçues pour cibler des séquences génétiques spécifiques du grand amicélium, telles que des séquences de gènes nucléaires ou de gènes chloroplastiques spécifiques à l'espèce. Dans le système réactionnel de PCR, si l'ADN de l'amicéleri est présent, les amorces se lient spécifiquement à la région correspondante de cet ADN pour l'amplification génique sous l'action de la Taq DNA polymérase. Dans le même temps, la sonde fluorescente s'hybride spécifiquement avec la séquence d'ADN cible amplifiée et l'enzyme Taq coupe la sonde fluorescente au cours de l'élongation, séparant le Groupe Fluorescent du Groupe de trempe, libérant le signal de fluorescence. La détection du grand amicélium dans l'échantillon est réalisée en surveillant en temps réel les variations du signal de fluorescence.Il présente les caractéristiques suivantes:

1. Prêt à l'emploi, l'utilisateur doit seulement fournir le modèle d'ADN échantillon.

2. Les amorces et les sondes sont optimisées, la sensibilité analytique est élevée et peut atteindre 100 copies / réaction.

3. Fournir un contrôle positif pour faciliter la distinction entre les échantillons faux négatifs.

Haute spécificité, l'amorce est conçue selon la région hautement conservée de l'ADN de l'amicéline, ne réagit pas avec d'autres ADN.

5. Peut être utilisé à la fois pour la détection qualitative et quantitative. Sa gamme linéaire n'est pas inférieure à 5 ordres de grandeur lorsqu'elle est utilisée pour la quantification.

6. Ce produit est suffisant pour 50 réactions PCR quantitatives de fluorescence par sonde du système de 20 μl.

7. Ce produit ne peut être utilisé que pour la recherche scientifique.

Spécifications et ingrédients:

Transport et conservation:Transport à basse température, - 20 ℃ conservation, durée de conservation 12 mois.
ADN d'échantillon de réactif autonome.

Grand Kit QPCR pour la méthode de la sonde amicéli (sans Ginseng interne)Méthode d'utilisation:
I. échantillon de courbe standard dilué(ces 6 dilutions 10x sont prises par example pour 10e1 - 10e6 copies / µl). En raison de la très forte concentration des étalons, les opérations de dilution suivantes doivent être effectuées dans des zones séparées et ne doivent pas contaminer l'échantillon ou d'autres composants de ce kit. Pour augmenter la stabilité du produit et éviter la propagation d'agents infectieux, ce produit ne fournit pas d'échantillons vivants pour un contrôle positif, mais uniquement des fragments d'ADN non infectieux pour un contrôle positif.

1. Marquer 6 tubes centrifuges, 6, 5, 4, 3, 2, 1.

2. Ajouter 45 UL de dilution de pochoir spécial PCR Fluorescent avec la tête de pistolet à noyau séparément, de préférence avec la tête de pistolet à noyau, la même chose).

Ajouter 5 μl 1 × 10e7 copies / μl de contrôle positif (kit fourni) dans le tube n ° 6, bien commotionner pendant 1 minute pour obtenir un échantillon de courbe standard de 1 × 10e7 copies / μl. Mettez de la glace à utiliser.

Changez la tête du pistolet, ajouter 5 μl 1 × 10e6 copies / μl de contrôle positif (résultant de la dilution de l'étape supérieure) dans le tube n ° 5, bien commotionner pendant 1 minute pour obtenir un échantillon de courbe standard de 1 × 10e6 copies / μl. Mettez de la glace à utiliser.

Changez la tête du pistolet, ajouter 5 μl 1 × 10e5 copies / μl de contrôle positif (résultant de la dilution de l'étape supérieure) dans le tube n ° 4, bien commotionner pendant 1 minute pour obtenir un échantillon de courbe standard de 1 × 10e4 copies / μl. Mettez de la glace à utiliser.

6. Répétez les opérations ci - dessus jusqu'à ce que vous obteniez 6 échantillons de courbe standard dilués. Mettez de la glace à utiliser.

Préparation de l'ADN de l'échantillon

7. S'il y a n échantillons, il est préférable de définir n + 2 extractions, un de plus est PC (contrôle positif de la préparation de l'échantillon) et un est NC (contrôle négatif de la préparation de l'échantillon). Il est possible d'utiliser 10 µl de la dilution n°4 obtenue à l'étape précédente plus une quantité d'eau pour obtenir un volume total identique au volume de départ demandé pour chaque préparation, comme

PC. également avec de l'eau comme NC.

8. Purifier l'ADN de l'échantillon avec la méthode de sélection automatique, ce kit est compatible avec la plupart des kits d'extraction d'ADN d'échantillon sur le marché. Il est également possible d'acheter des agents de libération d'acides nucléiques sans extraction de la société.

Iii. Réaction Probe QPCR (système de 20 μl, réalisée dans la Chambre de préparation des échantillons)

9. Si l'analyse quantitative est faite et seulement 1 répétition, marquer n + 9 tubes PCR, où N + 2

Pour les n + 2 échantillons obtenus à l'étape précédente, 1 pour le contrôle PCR négatif (modèle avec de l'eau) et 6 pour la courbe standard. Si l'analyse qualitative est effectuée et qu'une seule répétition est effectuée, N + 4 tubes PCR sont marqués, dont n + 2 pour les n + 2 échantillons obtenus à l'étape précédente, 1 pour les contrôles PCR négatifs (modèle avec de l'eau) et 1 pour les contrôles PCR positifs (modèle directement avec la dilution de contrôle positif du tube n ° 4 de l'étape 6). Les étapes opératoires ne sont décrites ci - après qu'à titre d'exemple d'analyse quantitative.

10. Ajouter chaque ingrédient en appuyant sur le tableau dans le tube marqué(ce tableau ne répertorie qu'une seule répétition. Le tube témoin et le témoin négatif sont configurés avant que le témoin positif ne soit configuré et que l'échantillon témoin positif attende que tous les tubes soient stockés avec le couvercle à la fin):

11.upper après avoir couvert le couvercle, PCR selon les paramètres ci - dessous:

Iv. Traitement des données

12. Si ce kit est utilisé pour le test quantitatif, la courbe standard est tracée avec la valeur log de la concentration de contrôle positive comme axe horizontal et la valeur CT comme axe longitudinal. La valeur ct de l'échantillon à mesurer est extrapolée à partir de la courbe standard à la valeur log de la concentration d'ADN de l'échantillon, puis à sa concentration.

Si cette trousse est utilisée pour des tests qualitatifs et que seuls les tests positifs ou négatifs sont jugés, le contrôle négatif CT ne doit pas avoir de valeur numérique ou la valeur de CT doit être égale ou supérieure à 40. Les contrôles positifs doivent avoir une croissance logarithmique de fluorescence, une courbe d'amplification typique et une valeur de CT inférieure à 40. L'échantillon à tester est positif si son ct est inférieur à 40. Négatif s'il n'y a pas de valeur de CT, ou supérieure ou égale à 40.
Pour la recherche scientifique seulement, ne peut pas être utilisé pour le diagnostic clinique! Tous les produits sont destinés à un usage scientifique uniquement, ne doivent pas être utilisés à d'autres fins telles que le traitement des personnes ou des animaux et ne fournissent pas de produits et de services à toute personne. Sous réserve de la réception effective des instructions du produit, les instructions du site sont fournies à titre indicatif uniquement.