Cancer de l'estomac humain non différencié hgc27 (STR)

I. cancer de l'estomac humain non différencié hgc27 (STR)Conditions de culture

Deux,Traitement après réception des marchandises

Méthodes de traitement cellulaire de réanimation:Remplir le liquide de culture et sceller l'embouchure du flacon après la culture en bon état est le meilleur moyen de transporter les cellules. Recevez les cellules pulvériser l'ensemble avec de l'alcool à 75%Bouteille de cellules,Strictement stérileaprèsPlacer le cylindre cellulaire dans l'incubateur et laisser reposer pendant 2 à 4 heures pour stabiliser l'état cellulaire.Le microscope post - repos observe la croissance des cellules et effectue différents multiples de la photo - préservation des cellules (de préférence 40x, 100X, 200X un chacun), les trois premiers jours de la photo est une base après - vente importante, ne fournit pas de photo par défaut reçu en bon état.

Méthode de traitement des cellules cryoconservées:Après avoir reçu les cellules, observez s'il reste de la glace sèche dans la boîte à mousse, si le tube de congélation est intact ou s'il y a une situation de décongélation, si vous trouvez que la vaporisation de la glace sèche ou le tube de congélation a un phénomène de dégel cassé, veuillez prendre des photos à temps et nous contacter. Si la signature cellulaire ne nous contacte pas dans les trois jours suivant la réception, la réception est bonne par défaut. Réanimation du premier tube s'il y a un problème d'activité, veuillez nous contacter à temps, le technicien communique avec vous les instructions avant de réanimer le deuxième tube,Aucun problème avec le deuxième tube de récupération non autorisée sans contact avec nous ne sera pas vendu après.

Étapes de culture cellulaire

a)Passage cellulaire: siLorsque 80% de confluence n'est pas dépassé, le liquide de culture en bouteille est recueilli dans un tube à centrifuger, laissant 5 ml de milieu de culture et placé à 37 ° C, 5% CO₂Incubation en incubateur; Si la densité cellulaire est supérieure à 80%, la culture par passage est possible.

Cellules plaquéesLes étapes sont les suivantes:

1) jeter le surnageant de culture et laver les cellules 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium et magnésium;

2) Ajouter 1 ml de digestat (0,25% Trypsin - 0,53 mm EDTA) dans le flacon de culture, placer dans l'incubateur pour digérer pendant 1 min, puis observer la digestion des cellules sous un microscope, si la plupart des cellules deviennent rondes et tombent, rapidement revenir à la table d'opération, après quelques clics sur Le flacon de culture, ajouter 6 ml contenant 10% de sérumMilieu de cultureTerminer la digestion;

3) soufflez doucement les cellules, aspirez dans le tube de centrifugation après la chute, centrifugez à 1000 RPM pendant 5 - 8 min, jetez le surnageant et soufflez bien après avoir ajouté 1 - 2 ml de milieu de culture;

4) Compléter chaque flacon de 5 - 6 ml de milieu de culture et distribuer la suspension cellulaire à raison de 1: 2 dans de nouvelles boîtes de 6 cm contenant 5 - 6 ml de milieu de culture ou dans des flacons t25.

(soit 1 flacon t25 inoculé par passage à 2 flacons t25 ou 2 boîtes de pétri de 6 cm)

Cellules en suspensionLes étapes de la génération sont les suivantes:

1, méthode semi - liquide

Traitement de demi - échange de liquide, les flacons de culture verticaux sont laissés dans l'incubateur pendant environ 1 heure, sucer doucement environ 3 ml de milieu de culture, puis recharger 3 ml de milieu de culture, si le milieu de culture est lent à changer de couleur, peut ajouter directement environ 500 µl de FBS, le temps de passage peut être directement rechargé avec 5 ml de milieu de culture en deux flacons de culture, généralement de cette façon, environ 3 passages peuvent être centrifugés une fois, enlever les cellules mortes.

2, méthode de changement de liquide centrifuge

Si nécessaire flacon fractionné peut recueillir la suspension cellulaire dans le tube de centrifugation à 1000 RPM, centrifuger pendant 5 min, défausser le surnageant, ajouter 1 - 2 ml de solution de culture après remise en suspension, distribuer la suspension cellulaire dans un nouveau flacon t25 dans un rapport de 1: 2, ajouter 6 - 8 ml de nouveau milieu configuré selon les exigences des instructions pour maintenir la vitalité de croissance des cellules, le passage ultérieur selon la situation réelle dans un rapport de 1: 2 ~ 1: 5.

b etStockage des cellules congelées:

1, lorsque les cellules se développent pour couvrir 80% de la surface du flacon de culture, jeter le liquide de culture dans le flacon de culture t25 et laver les cellules une fois avec du PBS;

2, ajouter 0,25% de digestat environ 1 mL dans le flacon de culture, regarder sous le microscope inversé, à la rétraction des cellules après arrondir ajouter 5 ml de digestat pour terminer la digestion, puis souffler doucement les cellules pour les faire tomber, puis transférer la suspension dans un tube à centrifuger de 15 ml, centrifuger à 1000 RPM pendant 5 min;

3, abandonner le surnageant, les cellules précipitées sont ajoutées à 1 ml de lyophilisat yaji BIO sans sérum (réf.: c7001), après mélange dans le lyophilisateur.

4, mettre les cellules de congélation directement dans le réfrigérateur à - 80 ℃, si plus tard pour transférer les cellules dans le réservoir d'azote liquide, puisRéfrigérateur à - 80°ccentreStockage pendant plus de 24 heuresTransférer à nouveau dans le réservoir d'azote liquide.

C etRéanimation cellulaire:

1, retirer le tube de lyophilisation cellulaire de l'azote liquide (attention au port de la protectionMasque), le placer rapidement Décongeler dans un bain - Marie à 37 ° C jusqu'à ce qu'il n'y ait pas de cristallisation dans le lyophilisateur, puis essuyer la paroi externe du lyophilisateur avec de l'alcool à 75%;

2,Déplacer les cellules dans le lyophilisateur à contenir Dans un tube de centrifugation de 15 ml de 5 ml de milieu de culture, centrifuger à 1000 RPM pendant 5 min;

3,Abandon du surnageant, remise en suspension du précipité avec 5 ml de milieu, inoculationAu flacon de culture t25, mettreà 37 ℃, 5% CO₂Culture en incubateur cellulaire;

4, le lendemain, changez pour continuer la culture avec du milieu frais.

Précautions:Certaines cellules ne collent pas fermement et sont sujettes à la chute des cellules pendant le transport, ce qui est un phénomène normal. Si plus de dégagement peut recueillir tout le liquide de culture dans le tube de centrifugation, centrifuger à 1000 RPM pendant 5 min,CollecterCultiver la transition(culture contrastée ultérieure), le précipité est ajouté 1 - 2 ml, légèrement soufflé, remis en suspension, après 1 - 2 minutes de digestion, ajouter 5 ml de milieu pour terminer la réaction. Centrifuger à nouveau, abandonner le surnageant et remettre en suspension 1 - 2 ml de milieu. Le passage en flacons est ensuite effectué dans un rapport de 1: 2 (deux t25), complété par un nouveau milieu de culture à 5 - 8 ml / flacon et enfin placé dans37 ℃, 5 % CO₂Culture en incubateur cellulaire.

Les nouveaux et anciens clients sont les bienvenus pour consulter les commandes:Cancer de l'estomac humain non différencié hgc27 (STR)