Cellules épithéliales mammaires de Rat musqué immortalisées (identification du genre)

Un, Cellules épithéliales mammaires de Rat musqué immortalisées (identification du genre)Conditions de culture

Deux,Cellules épithéliales mammaires de Rat musqué immortalisées (identification du genre)) etTraitement après réception des marchandises

Méthodes de traitement cellulaire de réanimation:Remplir le liquide de culture et sceller l'embouchure du flacon après la culture en bon état est le meilleur moyen de transporter les cellules. Recevoir des cellules pour75% d'alcool pulvérisé entierLes cellulesbouteille，Strictement stérileaprèsPlacer le flacon de cellules dans l'incubateur et laisser reposer2 - 4 heures pour stabiliser l'état cellulaire- Oui.Après le reposLe microscope observe la croissance cellulaire et prend différents multiples de la cellule pour la conservation photographique (meilleur40x, 100X, 200X chacun)，Photos des trois premiers joursOuiBase après - vente importante, ne fournit pas de photo par défaut reçu en bon état.

Méthode de traitement des cellules cryoconservées:Après avoir reçu les cellules, observez s'il reste de la glace sèche dans la boîte à mousse, si le tube de congélation est intact ou s'il y a une situation de décongélation, si vous trouvez que la vaporisation de la glace sèche ou le tube de congélation a un phénomène de dégel cassé, veuillez prendre des photos à temps et nous contacter. Si la signature cellulaire ne nous contacte pas dans les trois jours suivant la réception, la réception est bonne par défaut. Réanimation du premier tube s'il y a un problème d'activité, veuillez nous contacter à temps, le technicien communique avec vous les instructions avant de réanimer le deuxième tube,Aucun problème avec le deuxième tube de récupération non autorisée sans contact avec nous ne sera pas vendu après.

Étapes de culture cellulaire

a)Passage cellulairePour:SiPas dépasséÀ 80% de confluence, le liquide de culture en bouteille est recueilli dans un tube à centrifuger, laissant 5 ml de milieu de culture et placé à 37 ° C, 5% CO₂Incubation en incubateur;Si la densité cellulairesuper80%, prêt pour la culture de passage- Oui.

Cellules plaquéesLes étapes sont les suivantes:

1) jeter le surnageant de culture et laver les cellules 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium et magnésium;

2) Ajouter 1 ml de digestat (0,25% Trypsin - 0,53 mm EDTA) dans le flacon de culture, placer dans l'incubateur pour digérer pendant 1 min, puis observer la digestion des cellules sous un microscope, si la plupart des cellules deviennent rondes et tombent, rapidement revenir à la table d'opération, après quelques clics sur Le flacon de culture, ajouter 6 ml contenant 10% de sérumMilieu de cultureTerminer la digestion;

3) soufflez doucement les cellules, aspirez dans le tube de centrifugation après la chute, centrifugez à 1000 RPM pendant 5 - 8 min, jetez le surnageant et soufflez bien après avoir ajouté 1 - 2 ml de milieu de culture;

4) Compléter chaque flacon de 5 - 6 ml de milieu de culture et distribuer la suspension cellulaire à raison de 1: 2 dans de nouvelles boîtes de 6 cm contenant 5 - 6 ml de milieu de culture ou dans des flacons t25.

(c'est - à - dire1 flacon t25 inoculé par passage à 2 flacons t25 ou 2 boîtes de pétri de 6 cm)

Cellules en suspensionLes étapes de la génération sont les suivantes:

1, méthode semi - liquide

Traitement de demi - échange, flacon de culture vertical reposant dans l'incubateurEnviron 1 heure, sucer doucement environ 3 ml de milieu de culture, puis recharger 3 ml de milieu de culture, si le milieu de culture est lent à changer de couleur, peut ajouter directement environ 500 µl de FBS, le temps de passage peut être directement rechargé avec 5 ml de milieu de culture dans deux flacons de culture, généralement de cette façon, environ 3 passages peuvent être centrifugés une fois, enlever les cellules mortes.

2, méthode de changement de liquide centrifuge

Si nécessaire flacon divisé peut recueillir la suspension cellulaire dans le tube de centrifugation1000rpm， Centrifuger pendant 5 min, éliminer le surnageant, remettre la suspension cellulaire dans un rapport de 1: 2 dans de nouveaux flacons t25 après reconstitution avec 1 - 2 ml de solution de culture, ajouter 6 - 8 ml de nouveau milieu configuré selon les instructions pour maintenir la viabilité de la croissance des cellules, les passages suivants sont effectués Dans un rapport de 1: 2 ~ 1: 5 selon la situation réelle.

b etStockage des cellules congelées:

1, lorsque les cellules se développent pour couvrir 80% de la surface du flacon de culture, jeter le liquide de culture dans le flacon de culture t25 et laver les cellules une fois avec du PBS;

2, ajouter 0,25% de digestat environ 1 mL dans le flacon de culture, regarder sous le microscope inversé, à la rétraction des cellules après arrondir ajouter 5 ml de digestat pour terminer la digestion, puis souffler doucement les cellules pour les faire tomber, puis transférer la suspension dans un tube à centrifuger de 15 ml, centrifuger à 1000 RPM pendant 5 min;

3, abandonner le surnageant, les cellules précipitées Ajouter 1 ml de yaji BIO sans sérum lyophilisat (Numéro de fret:C7001）， Ajouter au lyophilisateur après mélange.

4, placez les cellules stockées congelées directement dans-80 ℃ réfrigérateur est ok, comme plus tardvouloirTransfert des cellules dans un réservoir d'azote liquide,AlorsNécessaire dans- 80 ℃ réfrigérateurAu milieuStockagePlus de 24 heuresencoreTransférer dans le réservoir d'azote liquide.

C etRéanimation cellulaire:

1,Retrait du lyseur cellulaire de l'azote liquide (AttentionPorterProtectionMasque), le placer rapidement Décongeler dans un bain - Marie à 37 ° C jusqu'à ce qu'il n'y ait pas de cristallisation dans le lyophilisateur, puis essuyer la paroi externe du lyophilisateur avec de l'alcool à 75%;

2,Déplacer les cellules dans le lyophilisateur à contenir Centrifuger à 1000 RPM pendant 5 min dans un tube de centrifugation de 15 ml de 5 ml de milieu;

3,Abandonné, précipité5 ml de milieu de culture resuspendu, inoculéàFlacon de culture t25,MettreÀ37 ℃, 5 % CO₂Culture en incubateur cellulaire;

4,Le lendemain, la culture est poursuivie en remplaçant le milieu frais.

Précautions:Certaines cellules ne collent pas fermement et sont sujettes à la chute des cellules pendant le transport, ce qui est un phénomène normal. Si plus de dégagement peut recueillir tout le liquide de culture du flacon de culture dans le tube de centrifugation,Centrifugation à 1000 RPM pendant 5 min,CollecterCultiver la transition(culture contrastée ultérieure), précipité ajouter1-2ml， Souffler doucement, remettre en suspension et après 1 - 2 minutes de digestion, ajouter 5 ml de milieu pour terminer la réaction. Centrifuger à nouveau, abandonner le surnageant et remettre en suspension 1 - 2 ml de milieu. On effectue ensuite un passage en flacons (deux t25) à raison de 1: 2, on complète avec du nouveau milieu de culture à 5 - 8 ml / flacon et on place enfin à 37°c, 5% CO.₂Culture en incubateur cellulaire.