Coloration immunohistochimique multiple

NégociableMise à jour sur05/06

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Vue d'ensemble

Principe de coloration immunohistochimique multiple: utilisation du principe de liaison spécifique d'un antigène à un anticorps pour lier un seul anti à un antigène cible dans un tissu ou une cellule; Ajouter un anti - hrp marqué, il peut se lier spécifiquement à un anti, former un complexe "antigène - un anti - hrp marqué - deux anti", ajouter un colorant Fluorescent tyramine, en présence de HRP et *, la tyramine est activée et liée de manière covalente aux résidus protéiques à proximité de l'antigène, une grande quantité de fluorescéine est déposée dans la partie de liaison antigène - anticorps, de sorte que le signal est amplifié, en répétant les étapes ci - dessus plusieurs fois, en utilisant à chaque fois un anti - hrp différent et le colorant Fluorescent tyramine correspondant, vous pouvez atteindre plusieurs cibles

Détails du produit

Coloration immunohistochimique multipleÉtapes expérimentales

Préparation des échantillons: traitement comprenant des coupes de paraffine, des coupes congelées ou des cellules rampantes, etc., comme la fixation, la réparation des antigènes, le blocage de la peroxydase endogène, etc.

Un anti - incubation: ajouter goutte à goutte un anti bien dilué avec une dilution d'anticorps, incuber dans une cassette humide protégée de la lumière pendant un certain temps.

Incubation anti - deux: après lavage, ajouter un anti - deux marqué HRP avec un anti - genre correspondant, incuber à l'abri de la lumière à température ambiante.

TSA colorant Fluorescent: ajouter goutte à goutte le colorant Fluorescent tyramine, laver après un certain temps de réaction à température ambiante.

élution d'anticorps: les anticorps du tour précédent sont élués par des méthodes telles que la réparation thermique ou l'éluant d'anticorps pour le tour suivant de marquage.

Marquage répété: répétez les étapes ci - dessus en utilisant différents colorants mono - anti et fluorescents pour obtenir un marquage multiple.

Refection des noyaux et des capsules: refection des noyaux avec des colorants nucléaires tels que dapi, ajout goutte à goutte de capsules antifluorescentes.

Prise de vue par microscopie: observation et acquisition d'images sous un appareil tel qu'un microscope à fluorescence.

Coloration immunohistochimique multiplePrécautions

Sélection et optimisation des anticorps: Sélectionnez des anticorps hautement spécifiques et validés et optimisez les conditions telles que la concentration et le temps d'incubation des anticorps.

Problème de masquage épitopique: Notez l'ordre de coloration des anticorps et évitez le phénomène de masquage épitopique, qui peut être résolu en ajustant l'ordre des anticorps ou en adoptant d'autres méthodes.

Paramètres de contrôle expérimental: les contrôles positifs et négatifs sont définis pour assurer la précision et la fiabilité des résultats expérimentaux.

Contrôle de l'amplification du signal: en fonction des besoins expérimentaux spécifiques et de l'intensité du signal de fluorescence, il est raisonnable de choisir d'ajouter ou non des moyens tels que des intensificateurs TSA pour contrôler l'amplification du signal.

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