Kit de culture organoïde (cancer du foie, du côlon, du rein)

Mode d'emploi

1, la génération originale
(1) les tissus prélevés doivent être placés dans un flacon de prélèvement prérefroidi (2 - 8 °C) contenant du liquide de conservation des tissus e, être rapidement transportés dans un laboratoire propre pour le traitement des tissus et la séparation des cellules, être photographiés et enregistrer les informations.
(2) préparer plusieurs boîtes de pétri, ajouter le tampon de culture primaire B pré - refroidi à 4 ° C pour la sauvegarde.
(3) désinfection du flacon d'échantillonnage, mettre le tissu dans une boîte de pétri, après trois lavages avec le tampon de culture primaire B, couper le tissu Jian en volume d'environ 1 - 3 mm avec Jian ophtalmique ou Dao chirurgical3Bloc d'organisation.
(4) les tissus digèrent la digestion Ye C avec les tissus primaires du cancer du sein humain, 37 ℃ digestion par commotion pendant 10 - 20min, (la digestion est observée à tout moment pendant la digestion).
(5) après avoir pris une petite quantité de liquide pour l'observation au microscope, où plus de cellules individuelles ou des grappes de cellules inférieures à 70 µm ont été observées, ajouter trois fois le volume de tampon de culture primaire b Pour terminer la digestion.
(6) filtration à l'aide d'un tamis de diamètre de pores de 100 µm, après collecte du filtrat, décapage du surnageant après centrifugation d'enrichissement à 300 g pendant 5 min, ajout du tampon de culture primaire B à nouveau centrifugé.
(7) Calcul de la colle matricielle: le volume de tissu collecté est observé après l'étape 6, ajout de 25 fois le volume de tissu de la colle matricielle (abs9495), planche de resurfaçage.
(8) exemple de plaque de culture cellulaire 24 puits, 25 µl de mélange de colle de matrice tissulaire par puits sont étalés (opération à 4 ° c).
(9) Mettre la plaque de culture pavée dans un incubateur à 37 ℃ pendant 10 - 15 min pour gélifier, ajouter le milieu de culture organoïde a du cancer du sein humain (revenir à la température ambiante) pour la culture.
2, culture de passage d'organoïdes
(1) Le pistolet à pipette aspire le milieu de décantation et ajoute 1 - 2 ml de tampon g de culture de passage d'organoïdes à 4 ° C par puits pendant 2 min.
(2) pistolet à pipette souffler doucement la colle de matrice, recueillir dans un tube de centrifugation de 15 ml, 4 ℃ laisser reposer pendant 10 min. (un groupe tous les 6 - 8 trous)
(3) A: nombre insuffisant ou faible volume d'organoïdes: centrifuger 5 min pour éliminer le surnageant, ajouter la quantité appropriée de tampon de culture de passage d'organoïdes g pour remettre en suspension dans un tube de centrifugation de 1,5 ML, centrifuger 300 g de liquide d'élimination pendant 5 min pour l'étape 4.
B: lorsque les organoïdes sont plus nombreux ou volumineux: centrifuger 5 min pour éliminer le surnageant, ajouter la bonne quantité de digestif de passage d'organoïde D pour digérer 2 - 3 min, ajouter le tampon de culture de passage d'organoïde g Pour terminer la digestion, centrifuger 5 min pour éliminer le mélange, ajouter la bonne quantité de tampon de culture de passage d'organoïde g pour remettre en suspension dans un tube de centrifugation de 1,5 ML, centrifuger 300 g de digestif de passage d'organoïde D pour effectuer l'étape 4.
(4) après la collecte des organoïdes, ajouter de la colle matricielle pour remettre en suspension, 25 µl de colle matricielle par puits sont étalés dans une plaque de culture cellulaire de 24 puits, placer l'incubateur dans 10 - 15 min Ajouter 500 µl de milieu de culture organoïde a pour le cancer du sein humain.
3, congélation des organes
(1) Le pistolet à pipette aspire le milieu de décantation et ajoute 1 - 2 ml de tampon g de culture de passage d'organoïdes à 4 ° C par puits pendant 2 min.
(2) pistolet à pipette souffler doucement la colle de matrice, recueillir dans un tube de centrifugation de 15 ml, 4 ℃ laisser reposer pendant 10 min. (un groupe tous les 6 - 8 trous)
(3) centrifuger 5 min pour éliminer le surnageant, ajouter la quantité appropriée de tampon de culture de passage d'organoïdes g pour remettre en suspension à nouveau, 300 g centrifuger 5 min pour éliminer le liquide.
(4) ajoutez la quantité appropriée de lyophilisat d'organoïde F, soufflez doucement pour remettre en suspension, prenez la plaque de culture cellulaire de 24 puits comme exemple: la densité est de 2 puits de lyophilisation 1 tube, chaque volume de tube 1,4 ML.
(5) faites bien les informations de marquage, effectuez le refroidissement du programme après, déplacez - vous dans l'azote liquide pour une conservation à long terme.
4, réanimation organoïde
(1) prélever 10 ml de tampon de culture de passage d'organoïdes g dans un tube à centrifuger de 15 ml.
(2) retirez les cellules organoïdes congelées du réservoir d'azote liquide et placez - les rapidement dans un bain - Marie à 37 ° C pour fondre.
(3) dans le processus de fusion du bain d'eau, le tube de congélation doit être légèrement agité pour assurer la fusion du liquide de congélation en 1 - 2 minutes.
(4) transférer rapidement les organoïdes dissous dans un tube de centrifugation de 15 ml, souffler doucement 6 - 8 fois à l'aide d'une pipette, centrifuger à 300 g pendant 5 min, puis éliminer le surnageant et recueillir le précipité organoïde. Ajouter une quantité appropriée de tampon de culture de passage d'organoïdes g resuspendre dans un tube à centrifuger de 1,5 ml 300 g pendant 5 min.
(5) la colle de matrice est remise en suspension, 25 µl de colle de matrice par puits sont étalés dans une plaque de culture cellulaire de 24 puits, placés dans l'incubateur pendant 10 - 15 minutes pour le collage, ajouter 500 µl de milieu de culture organoïde a pour le cancer du sein humain.