Kit ELISA mélatonine (MT) pour rat

Kit ELISA mélatonine (MT) pour rat

lCe kit est destiné à la détection quantitative in vitroSérum, plasma, homogénats de tissus et échantillons liquides associéscentreMélatonine de rat(MT) du contenu.

lValidité: 6 mois

lConditions de conservation:2-8℃

lCe kit est destiné à un usage scientifique uniquement, il ne doit pas être utilisé pour le diagnostic clinique

Principes expérimentaux

Le kit utilise le test d'immunoadsorption enzymatique (ELISA) par la méthode sandwich en une étape à deux anticorps. Les paquets pré - emballés d'anticorps captés par la mélatonine de rat (MT) ont été placés dans des micropores, puis des échantillons, des étalons, des anticorps de détection marqués HRP ont été ajoutés, incubés et * lavés. La couleur est révélée avec le substrat TMB qui se transforme en bleu sous la catalyse de la peroxydase et en jaune final sous l'action de l'acide. La nuance de couleur et la mélatonine de rat (MT) dans l'échantillon étaient positivement corrélées. La concentration de l'échantillon a été calculée en déterminant l'Absorbance (valeur OD) à une longueur d'onde de 450 nm à l'aide d'un étalon enzymatique.

Traitement des échantillons et exigences

1. sérumPour:Les échantillons de sang total recueillis dans les tubes de séparation du sérum sont laissés à température ambiante pendant 2 heures ou 4 °C pendant une nuit, puis centrifugés à 1000 × g pendant 20 minutes et le surnageant est prêt à être prélevé ou conservé à - 20 °C ou - 80 °C, mais la congélation et la dégel répétées doivent être évitées.
2. Plasma sanguinPour:Les spécimens ont été prélevés avec de l'EDTA ou de l'héparine comme anticoagulant et centrifugés à 2 - 8 ℃ 1000 × g pendant 15 minutes dans les 30 minutes suivant la collecte, le surnageant étant détectable ou le surnageant étant conservé à - 20 ℃ ou - 80 ℃, mais la congélation et la dégel répétées doivent être évitées.
3. Homogénat de tissu:Les tissus sont rincés avec du PBS prérefroidi (0,01 M, pH = 7,4), le sang résiduel est éliminé (les globules rouges lysés dans l'homogénat influencent les mesures) et les tissus sont déchiquetés après pesée. Tissu cisaillé avec le volume correspondant de PBS (généralement dans un rapport poids / volume de 1: 9, par exemple, un échantillon de tissu de 1 G correspond à 9 ml de PBS, le volume spécifique peut être ajusté de manière appropriée en fonction des besoins expérimentaux et bien documenté. Inhibiteur de protéase recommandé dans le PBS) Ajouter dans un homogénateur en verre, bien broyer sur la glace. Pour lyser davantage les cellules tissulaires, l'homogénat peut être soumis à une fragmentation par ultrasons ou à des dégel - gels répétés. Après centrifugation de l'homogénat à 5000 × g pendant 5 ~ 10 minutes, le nettoyage est détecté.

4. Éclaircissement des cultures cellulaires ou autres spécimens biologiques:S'il vous plaît centrifuger 1000 × g pendant 20 minutes, enlever le surnageant peut être détecté, ou mettre le surnageant à - 20 ℃ ou - 80 ℃ pour la conservation, mais devrait éviter la congélation et la dégel répétés.

Remarque: l'hémolyse d'un spécimen peut affecter les résultats des tests ultérieurs, de sorte que les spécimens hémolytiques ne sont pas appropriés pour effectuer ce test.

Réactifs et équipements nécessaires et non fournis

• Marqueur enzymatique (450nm)

• Sampler de haute précision et tête de pistolet: 0,5 - 10ul, 2 - 20ul, 20 - 200ul, 200 - 1000ul

• 37 ℃ boîte de température constante

• Eau distillée ou désionisée

Composition du kit

Kit ELISA mélatonine (MT) pour ratPréparationNotePour:

1. La concentration standard est dans l'ordre: 80, 40, 20, 10, 5, 2,5 pg / ml

2. Après un grand nombre d'essais de spécimens normaux, les valeurs de concentration normales des spécimens sont toutes dans la plage de détection fournie par le kit, 50 μl d'échantillon directement sur l'échantillon pendant l'expérience est OK. Lorsqu'une partie de la valeur de l'échantillon dépasse la concentration de zui Big standard, des dilutions d'échantillon sont disponibles pour diluer correctement l'échantillon avant de l'expérimenter.

Précautions

• L'incubation est effectuée dans le strict respect du temps et de la température prescrits pour garantir des résultats précis. Tous les réactifs doivent atteindre la température ambiante de 20 - 25 ° C avant utilisation. Réfrigérer le réactif de conservation immédiatement après utilisation.

• Un lavage incorrect de la plaque peut entraîner des résultats inexacts. Assurez - vous d'aspirer le liquide à l'intérieur des pores autant que possible avant d'ajouter le substrat. Ne laissez pas sécher les micropores pendant l'incubation.

• Éliminez le liquide résiduel et les empreintes digitales au fond de la plaque, sinon cela affecte la valeur od.

• Le liquide chromogène du substrat doit être incolore ou de couleur très claire, et les liquides de substrat qui ont changé de couleur bleue ne peuvent pas être utilisés.

• Évitez la contamination croisée des réactifs et des spécimens afin de ne pas donner de mauvais résultats.

• Évitez l'exposition directe à la lumière vive pendant le stockage et l'incubation.

• Équilibrer à la température ambiante avant d'ouvrir le sac scellé pour empêcher les gouttes d'eau de s'agglomérer sur les lattes froides.

• Aucun réactif réactionnel ne peut entrer en contact avec le solvant de blanchiment ou les gaz intenses émis par le solvant de blanchiment. Tout ingrédient de blanchiment perturbe l'activité biologique des réactifs dans le kit.

• Les produits périmés ne peuvent pas être utilisés.

• Si la propagation de la maladie est possible, tous les échantillons doivent être bien gérés, les échantillons et les dispositifs de détection doivent être traités conformément aux procédures prescrites.

Préparation des réactifs

Le kit doit être retiré de l'environnement réfrigéré et utilisable après l'équilibrage de la température ambiante.

Dilution du tampon de lavage 20x: l'eau distillée est diluée à 1: 20, soit 1 partie de tampon de lavage 20x plus 19 parties d'eau distillée.

étapes de fonctionnement

1. Retirez les lamelles nécessaires du sac en papier d'aluminium après 20 min d'équilibre à la température ambiante et remettez les lamelles restantes à 4 ° C hermétiquement avec un sac auto - scellé.

2. Mettre en place des trous standard et des trous d'échantillon, chaque trou standard plus 50 μl de standard à différentes concentrations;

3. 50 µl de l'échantillon à mesurer sont ajoutés dans le puits de l'échantillon; Les trous vides ne sont pas ajoutés.

4. En plus des puits vides, 100 µl d'anticorps de détection marqués à la peroxydase de raifort (HRP) ont été ajoutés par puits dans les puits standard et les puits d'échantillon, les puits réactionnels ont été scellés avec une membrane de plaque de scellement et incubés dans un bain - Marie à 37 ° C ou un incubateur pendant 60 min.

5. Jeter le liquide, tamponner sur le papier absorbant, remplir chaque puits avec du liquide de lavage (350 μl), laisser reposer pendant 1 min, jeter le liquide de lavage, tamponner sur le papier absorbant, ainsi répéter le lavage de la plaque 5 fois (peut également laver la plaque en machine).

6. 50 µl chacun des substrats a, B sont ajoutés par puits et incubés à 37°c à l'abri de la lumière pendant 15 min.

7. On ajoute 50 µl de liquide de terminaison par puits pendant 15 min, la valeur de do de chaque puits étant déterminée à une longueur d'onde de 450 nm.

Calcul des résultats expérimentaux

En prenant la valeur od de l'étalon mesuré en abscisse et la valeur de concentration de l'étalon en ordonnée, la courbe standard est tracée sur le papier de coordonnées ou avec le logiciel associé et on obtient une équation de régression linéaire qui remplace la valeur od de l'échantillon dans l'équation et calcule la concentration de l'échantillon.

Performance du kit

• Plage de détection: 2,5 pg / ML – 80 pg / ML.

• Sensibilité: faible concentration de détection inférieure à 0,1 pg / ML.

• Spécificité: pas de réaction croisée avec d'autres analogues structuraux solubles.

• Répétabilité: coefficient de variation intra - plaque inférieur à 10% et coefficient de variation inter - plaque inférieur à 15%.

Explication

Étant donné que les conditions actuelles et le niveau scientifique et technique ne permettent pas de procéder à une identification et à une analyse complètes de toutes les matières premières fournies par tous les fournisseurs, ce produit peut présenter certains risques techniques liés à la qualité.

• Les résultats expérimentaux finaux sont étroitement liés à l'efficacité du réactif, aux opérations pertinentes de l'expérimentateur et à l'environnement expérimental à ce moment - là, assurez - vous de préparer une sauvegarde adéquate des spécimens.

• Différents lots du même produit peuvent varier légèrement, tels que: la limite de détection, la sensibilité et le temps de rendu des couleurs, etc., s'il vous plaît suivez les instructions dans le kit pour les opérations expérimentales, les instructions de la version électronique du site Web sont uniquement à titre de référence.

• Seul l'utilisation totale de ce kit de kit de soutien peut garantir l'effet de détection, ne peut pas mélanger les produits d'autres fabricants. Seul le strict respect des instructions expérimentales de ce kit donnera un résultat de détection de *.

• La société n'est responsable que du kit lui - même et n'est pas responsable de la consommation d'échantillons résultant de l'utilisation de ce kit, l'utilisateur est invité à réserver des échantillons suffisants avant utilisation, en tenant pleinement compte de la quantité d'utilisation possible de l'échantillon.

• Les homogénats de tissus ou les extraits cellulaires préparés à l'aide de lysats chimiques peuvent fausser les résultats des expériences ELISA en raison de l'introduction de certaines substances chimiques.

• Si l'échantillon est clair pour la culture cellulaire, il peut y avoir des situations indétectables en raison de plus de facteurs perturbateurs tels que: l'état des cellules, le nombre de cellules, le temps d'échantillonnage, etc.

• Certaines protéines naturelles ou recombinantes, y compris les protéines recombinantes procaryotes et eucaryotes, peuvent ne pas être détectées car elles ne correspondent pas aux anticorps de détection et de capture utilisés pour ce produit.