Kit sans détection enzymatique Shanghai

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Kit sans détection enzymatiqueComposition typique:

Un kit ELISA standard contient généralement les composants suivants:

1, pré - emballé dans une microplaque: 96 puits ou 48 puits en plastique, à l'intérieur des puits ont été pré - emballés pour capturer les anticorps ou les antigènes (selon le type). C'est là que la réaction a lieu.

2, Enzyme - étalon - bianc (ou Enzyme - étalon pour détecter les anticorps / antigènes): selon le type ELISA, fournir un dianc marqué à la peroxydase de raifort ou à la phosphatase alcaline (pour la méthode indirecte ou sandwich), ou un antigène enzymatique - étalon (pour la méthode compétitive).

3, Standard: une solution de gradient de série d'antigènes (ou d'anticorps) avec une concentration précise connue. Utilisé pour tracer la courbe standard, calculer la concentration de la substance à mesurer dans l'échantillon.

Détection d'anticorps (méthode sandwich uniquement): anticorps non marqués dirigés contre un autre épitope de l'antigène.

5, diluant d'échantillon: utilisé pour diluer l'échantillon afin que sa matrice corresponde aux normes et au système tampon, réduisant ainsi les interférences non spécifiques.

Tampon de lavage: généralement un tampon phosphate contenant du Tween - 20. Pour laver les substances non liées entre les étapes, réduisant les interférences de fond. Le lavage est - il la clé du succès ou de l'échec d'une expérience?

7, liquide de fermeture: l'albumine de sérum bovin commune ou la solution de poudre de lait écrémé. Pour fermer les sites non liés sur la microplaque après le packaging, empêcher l'adsorption non spécifique dans les étapes ultérieures, abaisser le fond.

8, solution de substrat:

Pour HRP: tétraméthylbenzidine ou 3,3 ', 5,5' - tétraméthylbenzidine couramment utilisés.

Pour AP: phosphate de P - nitrophényle couramment utilisé.

9, liquide de terminaison:

Pour HRP - TMB: une solution diluée d'acide sulfurique est couramment utilisée.

Pour ap - PNPP: solution couramment utilisée *. Pour mettre fin à la réaction enzymatique et stabiliser la couleur finale.

10, film d'étanchéité de plaque: couvrir la microplaque pendant l'étape d'incubation pour empêcher l'évaporation et la contamination.

11, instructions: étapes de fonctionnement détaillées, conditions de conservation des réactifs, précautions, résultats attendus et méthodes de tracé de courbe standard, etc.

Traitement des échantillons et exigences:

1. Sérum: les échantillons de sang total recueillis dans le tube de séparation du sérum sont laissés à température ambiante pendant 2 heures ou 4 ° C pendant la nuit, puis centrifugés à 1000 × g pendant 20 minutes, le surnageant est ok, ou le surnageant est placé à - 20 ° C ou - 80 ° C pour La conservation, mais la congélation et la dégel répétés doivent être évités.

2. Plasma: les spécimens sont prélevés avec de l'EDTA ou de l'héparine comme anticoagulant et centrifugés à 2 - 8 ℃ 1000 × g pendant 15 minutes dans les 30 minutes suivant la collecte, le surnageant est détectable ou le surnageant est placé à - 20 ℃ ou - 80 ℃ pour la conservation, mais la congélation répétée et la dégel doivent être évités.

Homogénat de tissus: rincer les tissus avec du PBS pré - refroidi (0,01 M, pH = 7,4), éliminer le sang résiduel (les globules rouges lysés dans l'homogénat affecteront les résultats de la mesure), peser les tissus, les déchiqueter. Tissu cisaillé avec le volume correspondant de PBS (généralement dans un rapport poids / volume de 1: 9, par exemple, un échantillon de tissu de 1 G correspond à 9 ml de PBS, le volume spécifique peut être ajusté de manière appropriée en fonction des besoins expérimentaux et bien documenté. Inhibiteur de protéase recommandé dans le PBS) Ajouter dans un homogénateur en verre, bien broyer sur la glace. Pour lyser davantage les cellules tissulaires, l'homogénat peut être soumis à une fragmentation par ultrasons ou à des dégel - gels répétés. Enfin, l'homogénat est centrifugé à 5000 × g pendant 5 ~ 10 minutes pour obtenir un test de nettoyage.

4.clearing de la culture cellulaire: s'il vous plaît centrifuger 1000 × g pendant 20 minutes, retirer le Clearing peut être détecté, ou mettre le Clearing à - 20 ℃ ou - 80 ℃ pour la conservation, mais devrait éviter la congélation et la dégel répétés.

5. Autres spécimens biologiques: centrifuger à 1000 × g pendant 20 minutes, les enlever et les détecter.

6. Apparence de l'échantillon: l'échantillon doit être clair et transparent, les matières en suspension doivent être enlevées par centrifugation.

7. Conservation de l'échantillon: après la collecte de l'échantillon, si le test effectué dans un délai de 1 semaine peut être conservé à 4 ℃, s'il ne peut pas être testé dans le temps, s'il vous plaît diviser en une seule quantité d'utilisation, conserver congelé à - 20 ℃ (test dans 1 mois), ou - 80 ℃ (test dans 6 mois), éviter la congélation répétée et la dégel, l'hémolyse des échantillons affectera le résultat du test final, de sorte que les échantillons hémolytiques ne sont pas appropriés pour effectuer ce

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