U-Blot® Film de transfert PVDF (0,2 μm)

U-Blot ® Film de transfert PVDF (0,2 μm)Est une membrane microporeuse de fluorure de polyvinylidène (PVDF) utilisée pour transférer des protéines de diverses matrices gélifiées. Comparé au film de nitrocellulose, il a de meilleures propriétés de fonctionnement.

Cette Membrane hydrophobe est disponible en deux tailles de pores: 0,45 µm et 0,2 µm, ce qui lui permet de lier des protéines de différentes gammes de poids moléculaires:

• Taille des pores de 0,45 μm: convient à la plupart des protéines, offrant une sensibilité de détection plus élevée.

• Taille des pores de 0,2 μm: convient aux protéines de poids moléculaire inférieur à 20 000, assurant une meilleure adsorption et rétention des protéines de petites molécules.

U-Blot ® Les membranes de transfert PVDF ont une excellente rétention des protéines, une résistance physique élevée et une large compatibilité chimique, ce qui en fait un choix pour les immunoessais.

U-Blot ® Film de transfert PVDF (0,2 μm)

1. Séparer l'échantillon de protéine et la protéine Marker avec le gel SDS PAGE.

2. Coupez et placez le gel soigneusement et équilibrez le gel dans le tampon de transfert froid pendant 5 ~ 20 minutes.

3. Coupez la membrane et le papier filtre à une taille adaptée au gel. Le film de PVDF est pré - humidifié dans du méthanol pendant 20 secondes jusqu'à ce qu'il passe d'un blanc opaque à un gris translucide homogène, puis immergé dans de l'eau Ultrapure pendant 1 à 2 minutes pour éliminer les résidus de réactifs; Ensuite, équilibrez dans le tampon de transfert froid pendant 2 - 3 minutes jusqu'à ce que vous puissiez l'utiliser.

Utilisez le rappel:

Ne laissez pas sécher le film après l'avoir mouillé. Si la membrane sèche partiellement (devient opaque et blanche), elle doit également être re - humidifiée.

4. Assembler le dispositif de transfert à son tour, clip de transfert éponge pad filtre papier pré - humidifié film découpé et pré - humidifié gel filtre papier éponge pad transfert clip, chaque couche placée doit prendre soin d'éviter les rides, pliage ou la présence de bulles d'air (peut utiliser des outils tels que le panneau de découpe pour presser doucement les bulles d'air, de sorte que chaque couche est étroitement collée)

5. Commencez le transfert en suivant les instructions du dispositif de transfert utilisé pour définir les conditions de fonctionnement, etc.

6. Une fois le transfert terminé, retirez le film d'impression et retirez les débris de gel avec un court rinçage dans de l'eau ultra pure. La membrane de Blot peut être stockée à sec à l'air ou utilisée immédiatement pour l'étape d'immunodétection.

Certains facteurs clés pour la réussite des expériences de Western Blot, tels que la concentration en protéines, le liquide de blocage et la concentration en anticorps, peuvent nécessiter une optimisation dans les protocoles suivants.

Test immunologique standard

1. Si le film imprimé a séché, veuillez le tremper à nouveau dans du méthanol pendant 15 secondes ou jusqu'à ce que sa couleur change d'un blanc opaque à un gris translucide.

2. Rincez le film d'impression avec de l'eau ultra pure pendant 1 minute.

3. Placez la membrane de Blot dans le tampon de fermeture et incuber pendant 1 heure en agitant doucement.

4. Diluer un anti dans une dilution d'anticorps commercialisé, un tampon de lavage ou un tampon de blocage.

5.placez la membrane de Blot dans une solution diluée d'un anti et incuber à température ambiante pendant 1 heure (ou une nuit à 4°C) en agitant doucement.

6. Utilisez le tampon de lavage (avec Tween) ®- 20 Le tampon de tensioactif (tbst ou pbst)) lave la membrane de Blot 3 à 5 fois pendant 5 minutes chacune.

7. Diluer l'anti - di dans une dilution d'anticorps commercialisé, un tampon de lavage ou un tampon de blocage.

8. Placez la membrane de Blot dans une solution diluée de l'enzyme marquée anti - bis et incuber à température ambiante pendant 1 heure.

9. Laver la membrane de Blot avec le tampon de lavage 3 - 5 fois pendant 5 minutes chacune.

10. Placez le film de transfert dans un récipient propre et ajoutez le réactif de détection correspondant.

11. Suivez les instructions pour les réactifs utilisés pour la détection et incuber pendant 1 à 5 minutes.

(1) pour les réactifs chimiluminescents HRP ou AP, exposer le film imprimé à un film à rayons X ou utiliser un système d'imagerie pour obtenir une image numérique.

(2) pour la détection du rendu des couleurs, ajoutez le réactif et attendez que le signal apparaisse.