Kit de séquençage illumina nextseq 500 / 550 V2.5

Nom du produit:Kit de séquençage illumina nextseq 500 / 550 V2.5(150 cycles) disponible en stock

Numéro de produit: 20024904

Marque de produit: illumina / inmena USA

Kit de séquençage illumina nextseq 500 / 550 en stock， Illumina Sequencing Kit disponible en stock Bienvenue sur demande

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La technologie de séquençage de deuxième génération llumina, side Synthetic side Sequencing (SBS), est une technologie de séquençage de nouvelle génération largement adoptée, responsable de la production de plus de 90% des données de séquençage dans le monde.

La technologie de séquençage de deuxième génération d’illumina s’appelle Sequencing by Synthesis (SBS). Le SBS comprend principalement 3 étapes d'extension de base, d'excitation par fluorescence et de collecte de signaux, de cisaillement, etc. Ces 3 étapes peuvent être répétées et le cycle se déroule. Une base est déterminée une fois par cycle. Pour déterminer le nombre de bases (c'est - à - dire la longueur de la lecture), faites le cycle autant de fois que vous le souhaitez. Le nombre de cycles de séquençage peut être défini dans le logiciel. La longueur exacte du séquençage est à déterminer en fonction de la nature du projet et des besoins. La plupart du temps, 1x50 bases ont été déterminées dans l'expérience SR (séquençage à une extrémité) et 2x150 bases dans l'expérience PE (séquençage à deux extrémités).

1 extension de base

Caractéristiques du dNTP utilisé dans les réactifs de séquençage illumina, ils ont deux groupes modificateurs à la fois: un groupe Fluorescent et un groupe Terminateur réversible. A, G, C, t 4 bases marquent chacune 4 groupes fluorescents différents qui, sous Excitation Laser à différentes longueurs d'onde, sont capables d'émettre de la fluorescence à différentes longueurs d'onde (c'est - à - dire la couleur). La couleur fluorescente correspond une à une aux espèces de base, de sorte que la base peut être identifiée en fonction de la longueur d'onde de la lumière d'excitation. Les groupes de terminaison des 4 bases sont les mêmes. En raison de la présence du Groupe Terminateur, tous les dNTP ne peuvent s'étendre que d'une base à la fois, quel que soit le temps de réaction donné. Ce groupe de terminaison étant également réversible, une fois le signal de fluorescence collecté, il est possible d'éliminer ce groupe de terminaison avec un agent de cisaillement, de sorte que la base retrouve son état naturel extensible, puis de procéder au cycle suivant pour déterminer une autre base.

La technique du Groupe terminaison réversible est une grande caractéristique du séquençage de deuxième génération d'illumina. Avec la technologie Bridge PCR, il constitue les deux piliers du séquençage de deuxième génération d’illumina et constitue une base solide pour l’obtention stable de données de séquençage de haute qualité.

2 acquisition de signaux

Les séquenceurs de la série hiseq ont deux tubes laser rouge - Vert, deux filtres chromatiques. Ils sont combinés deux à deux et peuvent former 4 longueurs d'onde d'excitation différentes, exactement pour exciter 4 bases a, G, C, t respectivement.

Les signaux produits par les groupes fluorescents marqués sur le cluster sous Excitation Laser peuvent être collectés par caméra ou par balayage. La technologie de numérisation est relativement rapide et a été adoptée par la série x10. Étant donné que la zone FC est relativement grande et que les surfaces supérieure et inférieure sont photographiées séparément, le processus de prise de vue prend beaucoup de temps. Pour le hiseq 2000 classique, le signal de fluorescence généré par un cycle de séquençage prend environ 40 minutes pour être photographié et collecté, plus longtemps que la réaction de séquençage elle - même.

3 cisaillement

Une fois le signal Fluorescent collecté, le laser est éteint et les groupes fluorescents marqués par les bases sur le produit d'extension de l'amorce de séquençage et les groupes de terminaison sont éliminés avec un agent de cisaillement. Les deux groupes modifiés sont excisés, d'une part pour éliminer la fluorescence interférente et, d'autre part, pour ramener les bases à l'extrémité de la chaîne à leur état naturel extensible, prêt pour la prochaine série de séquençage.

La répétition des étapes de synthèse, d'excitation, de collecte, etc., permet le séquençage de la deuxième base.

Le cycle de séquençage peut être répété plusieurs fois. Il est théoriquement possible de le répéter jusqu'à ce que le rapport signal sur bruit soit suffisamment réduit pour que le signal de base ne soit pas reconnu efficacement. Comme l'efficacité lumineuse des groupes fluorescents est constamment atténuée, de même que l'activité de l'enzyme Taq, le nombre de cycles de séquençage est en fait limité, le grand nombre de répétitions étant lié à la formulation du réactif SBS. Le nombre de cycles de séquençage peut être artificiellement au cours de la configuration du logiciel, et ce nombre de répétitions est la longueur de lecture de chaque fragment séquencé. Actuellement, les longueurs de lecture de la plate - forme illumina sont de 2x100 BP, 2x125 BP, 2x150 BP, 2x300 BP, etc., dont 2x150 BP est largement utilisé.

Séquençage à extrémité unique: séquençage à extrémité unique (Single - Read) un échantillon d'ADN est d'abord fragmenté pour former un fragment de 200 à 500 pb, la séquence d'amorce est attachée à une extrémité du fragment d'ADN, puis l'extrémité est couplée, le fragment est fixé sur une cellule de flux pour générer une grappe d'ADN et la séquence est lue à une extrémité.

Séquençage à deux extrémités: la méthode de séquençage à deux extrémités (paired end) consiste à ajouter un site de liaison d'amorce de séquençage sur le joint aux deux extrémités lors de la construction de la Banque d'ADN à tester, à retirer le brin modèle du * tour de séquençage une fois terminé, à régénérer et à amplifier Le brin complémentaire en position initiale avec un module de séquençage en lecture - paire (paired end module) pour atteindre la quantité de modèle utilisée pour le deuxième tour de séquençage, le séquençage synthétique du brin complémentaire du deuxième tour étant effectué.

Une banque génomique est un ensemble formé par le clonage de tout l'ADN génomique d'un organisme en fragments d'ADN d'une certaine longueur sur un vecteur. La Banque génomique est divisée en banque génomique nucléaire, Banque génomique des chloroplastes et Banque génomique mitochondriale en fonction de la source d'ADN. La Banque génomique a été construite avec l'ADN génomique comme donneur d'information génétique, donc sans période de développement et sans spécificité d'organe tissulaire, dans une * Banque génomique contenant des clones de toutes les séquences codantes et non codantes de l'ADN génomique; Chaque gène d'un organisme biologique a son clone dans une bibliothèque qui contient des séquences espacées dans ses fragments, de sorte que la Bibliothèque génomique peut afficher de manière réaliste toutes les informations structurelles du génome.

Définition de la Bibliothèque génomique: toute l'information génétique du génome d'un organisme est stockée à travers un vecteur de clonage dans une sous - population clonale de bactéries réceptrices qui est la Bibliothèque génomique de l'organisme.

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Nom du produit: illumina 20024904 kit de séquençage nextseq 500 / 550 V2.5 (150 cycles)

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