Un,Synthétiseur de Polypeptides entièrement automatiqueCalibrage et préparation des équipements

Installation et mise en service

L'installation et la mise en service de l'équipement sont effectuées par des techniciens professionnels, assurant le bon fonctionnement de l'équipement.

Vérifiez que la bouteille de réservoir de solvant est bien connectée au tuyau de gaz et que les parties de l'instrument sont en bon état.

Allumez l'interrupteur d'alimentation du synthétiseur et l'interrupteur d'air comprimé pour vérifier que la pression est conforme à la plage (par exemple, la pression de la jauge « air» est supérieure à 60 PSI et inférieure à 100 PSI); La pression de la jauge "n2" est supérieure à 5 PSI et inférieure à 10 PSI).

Calibration et essais

L'étalonnage et les essais de l'équipement sont effectués conformément aux instructions du fabricant, en veillant à ce que tous les systèmes (par exemple, pompes, vannes, détecteurs, etc.) fonctionnent correctement.

Effectuer des tests de température, Code à barres, agitation mixte du réacteur, aiguille de prélèvement, flacon poussoir d'acides aminés; Essai d'électrovanne; Calibrage du débit des flacons de réactifs chimiques et des flacons d'acides aminés; Calibration contrôlée par UV.

Choisir le récipient de réaction approprié

Choisissez le récipient de réaction approprié en fonction de l'échelle de synthèse et assurez - vous que le matériau du récipient ne réagit pas avec les réactifs ou le solvant.

II. Réactifs et préparation des matériaux

Préparation des réactifs

Préparer les acides aminés pour la synthèse, les réactifs d'activation, les solvants, etc., en veillant à ce que tous les matériaux soient frais et purs pour éviter l'introduction d'impuretés.

Selon le Protocole de synthèse, la pesée est effectuée dans les proportions requises de la substance, assurant la précision.

Les réactifs sont chargés successivement à l'intérieur de chaque flacon - réservoir portant l'étiquette correspondante.

Préparation de résine

La résine est ajoutée à un synthétiseur en phase solide, gonflée avec un solvant approprié tel que le DCM, puis essorée.

La résine est lavée à l'aide d'un solvant tel que le DMF pour éliminer les impuretés, et le lavage est terminé par l'extraction et la sauvegarde.

Iii. Opérations de synthèse

Définir les conditions de réaction

Les conditions de réaction appropriées sont fixées en fonction de la séquence et de la longueur du polypeptide désiré, y compris la température, la pression, le temps, etc.

Déprotection

Le Groupe protecteur de l'acide aminé précédent est éliminé pour lui permettre de réagir avec l'acide aminé suivant.

Par example, la déprotection est réalisée à l'aide d'une solution d'acide trifluoroacétique / dichlorométhane à 40% suivie d'un lavage au dichlorométhane, au méthanol, etc.

Couplage

Combinez le nouvel acide aminé avec celui qui a été déprotégé pour former une liaison peptidique.

Le premier acide aminé (généralement à partir du C - Terminal) est dissous avec un volume de DMF et activé par ajout d'un agent de condensation tel que DCC, hbtu, etc.

La solution d'acides aminés activée est introduite dans un synthétiseur en phase solide, additionnée de DMF à la concentration réactionnelle appropriée et la réaction de condensation est effectuée sous agitation.

laver

Nettoyez les substances et les sous - produits qui n'ont pas réagi pour assurer la pureté de la réaction.

Après chaque étape de synthèse terminée, il est nécessaire d'éliminer les sous - produits de la réaction et les matières premières qui n'ont pas réagi par lavage, réduisant ainsi l'accumulation d'impuretés.

Répétez les étapes

Les étapes de déprotection et de couplage sont répétées jusqu'à ce que la chaîne polypeptidique atteigne une longueur prédéterminée.

Coupe et purification des produits

Craquage des résines

Configurez le lysat (qui contient généralement un acide fort tel que le TFA) et proposez - le pour la conservation réfrigérée dans un congélateur frontal.

La résine peptidique est ajoutée dans le réacteur, le lysat prérefroidi est ajouté et la réaction est agitée pour craquer le polypeptide de la résine.

Le liquide réactionnel est libéré après la fin du craquage, la résine est éliminée par essorage et lavée dans un solvant tel que le TFA.

Purification des Polypeptides

Le lysat est transféré dans un évaporateur rotatif pour être concentré à température ambiante dans un petit volume.

Le polypeptide est décanté à l'aide d'un agent précipitant approprié tel que le méthyl - tert - butyléther et le Peptide brut est obtenu par centrifugation, lavage, etc.

Les Peptides bruts sont purifiés en utilisant des méthodes telles que la chromatographie liquide à haute performance (HPLC) pour éliminer les impuretés et isoler le polypeptide cible.

Concentration, filtration et lyophilisation

La solution de polypeptide purifiée est essorée pour éliminer le solvant organique et donner une solution concentrée de polypeptide.

La solution de polypeptide concentrée est soumise à une filtration aseptique.

La solution de polypeptide filtrée est placée dans un lyophilisateur avec un programme de montée en température approprié pour le traitement de lyophilisation.

V. Contrôle de la qualité et enregistrement

Surveillance du processus de réaction

Surveiller l'évolution de la réaction à l'aide de méthodes de détection appropriées (p. ex., détection UV, analyse par spectrométrie de masse, etc.) pour s'assurer que la réaction se déroule comme prévu à chaque étape.

Enregistrement et rapports

Enregistrez en détail les paramètres opérationnels et les résultats de chaque étape, y compris la quantité de réactif utilisée, le temps de réaction, la température, la pression, etc.

Produire des rapports expérimentaux qui résument les données clés du processus de synthèse et des informations telles que la pureté du produit.